本品系由含有可高效表達人生長激素基因的工程化細胞，經過發酵和純化后獲得的人生長激素，加入適宜穩定劑和/或保護劑制成的無菌液體制劑。本品可含抑菌劑，不含抗生素。每 1mg 人生長激素相當于 3.0IU。

1 基本要求

生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。

2 制造

2.1 工程細胞人生長激素工程化細胞名稱、來源及種子批檢定應符合批準的要求。2.2 原液

2.2.1 種子液制備

將檢定合格的工作種子批細胞接種于適宜的培養基（可含適量抗生素）中培養。2.2.2 發酵用培養基采用適宜的不含抗生素的培養基。

2.2.3 種子液接種及發酵培養

在滅菌培養基中接種適量種子液。在適宜的溫度下根據經批準的發酵工藝進行發酵。發酵液應定期進質粒丟失率檢查（通則 3406）。

2.2.4 發酵液處理

用適宜的方法收集并處理菌體。

2.2.5 純化

采用經批準的純化工藝進行純化，得到人生長激素原液。如需存放，應規定溫度和時間。

2.2.6 原液檢定

按 3.1 項進行。

2.3 半成品

2.3.1 配制與除菌

按經批準的配方配制稀釋液。將原液用稀釋液稀釋至所需濃度，過濾后即為半成品，保存于適宜的溫度。

2.3.2 半成品檢定

按 3. 2 項進行。

2.4 成品

2.4.1 分批

應符合生物制品分包裝及貯運管理（通則 0239）規定。

2.4.2 分裝

應符合生物制品分包裝及貯運管理（通則 0239）及注射劑（通則 0102）有關規定。

2.4.3 規格

（1）0.4ml:0.66mg（2IU） （2）0.75ml:1mg（3IU） （3）1ml:1.33mg（4IU） （4）0.9ml:1.5mg（4.5IU） （5）0.5ml:1.66mg（5IU） （6）0.6ml:2mg（6IU） （7）0.8ml:2.66mg（8IU） （8）1ml: 3.33mg（10IU） （9）1.5ml: 5mg（15IU） （10）3ml: 5mg（15IU）（11）1.5ml:10mg（30IU）（12）3ml: 10mg（30IU）（13）1.5ml: 15mg（45IU）

2.4.4 包裝

應符合生物制品分包裝及貯運管理（通則 0239）及注射劑（通則 0102）有關規定。

3 檢定

3.1 原液檢定

3.1.1 外觀

應為無色澄清或微濁液體。

3.1.2 鑒別

3.1.2.1 反相色譜法

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗。

試劑 三羥甲基氨基甲烷緩沖液（Tris 緩沖液） 取三羥甲基氨基甲烷 6.05g，加水溶解并稀釋至 900ml，用 1mol/L 鹽酸溶液調節 pH 至 7.5，并用水稀釋至 1000ml，搖勻。對照品溶液 取人生長激素對照品適量，加 Tris 緩沖液并制成每 1ml 中含人生長激素 2mg 的溶液。

供試品溶液 取人生長激素原液適量，照對照品溶液方法制備。

測定法 取對照品溶液和供試品溶液，按 3.1.3.1 相關蛋白項下的色譜條件試驗，記錄色譜圖。

結果判定 供試品溶液色譜圖中主峰的保留時間應與對照品溶液色譜圖中主峰的保留時間一致。

3.1.2.2 凝膠色譜法

在 3.1.4 項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。

3.1.2.3 毛細管電泳法

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

供試品溶液 取人生長激素原液，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液，該溶液與對照品溶液等體積混合，搖勻。

電泳條件 同 3.1.3.3 項下電泳條件。

測定法 取供試品溶液，按 3.1.3.3 項下的條件試驗，記錄電泳圖。

結果判定 在供試品溶液電泳圖中，人生長激素主峰應為無分裂單一峰。

3.1.2.4 肽圖

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗。

試劑 胰蛋白酶溶液 取經甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮（TPCK）處理的胰蛋白酶適量，加 3.1.2.1 反相色譜法項下的 Tris 緩沖液溶解并制成每 1ml 含 2mg 的溶液。對照品溶液 取人生長激素對照品，加 Tris 緩沖液溶解并制成每 1ml 中約含 2mg的溶液。取此液 300μl、胰蛋白酶溶液 20μl 與 Tris 緩沖液 300μl，混勻，置 37℃4 小時，立即置-20℃終止反應。供試品溶液 取人生長激素原液適量，必要時用 Tris 緩沖液稀釋至每 1ml 中約含2mg 的溶液，其他同對照品溶液方法制備。空白溶液 取人生長激素對照品適量，不加胰蛋白酶溶液，其他同對照品溶液方法制備。 

色譜條件 用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑（5～10μm），柱溫為 35℃；以 0.1%三氟乙酸溶液為流動相 A，以含 0.1%三氟乙酸的 90%乙腈溶液為流動相 B，按下表進行梯度洗脫，流速為每分鐘 1.0ml；檢測波長為 214nm；進樣體積 100μl。

測定法 取空白溶液、對照品溶液和供試品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

結果判定 排除空白溶液色譜峰后，供試品溶液肽圖應與對照品溶液一致。

3.1.2.5 N 末端氨基酸序列

至少每年測定 1 次。采用氨基酸序列分析儀或其他適宜的方法測定，N 端序列應為：F-P-T-I-P-L-S-R-L-F-D-N-A-M-L。

3.1.3 檢查

3.1.3.1 相關蛋白質

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗。

供試品溶液 取人生長激素原液適量，用 3.1.2.1 反相色譜法項下的 Tris 緩沖液稀釋并制成每 1ml 中約含 2mg 的溶液。

系統適用性溶液 取人生長激素對照品適量，用 Tris 緩沖液溶解并制成每 1ml 中約含 2mg 的溶液，過濾除菌，室溫放置 24 小時。

色譜條件 用丁基硅烷鍵合硅膠為填充劑（5～10μm)，柱溫為 45℃；以 Tris 緩沖液正丙醇（71:29)為流動相，可調節流動相中正丙醇比例使人生長激素主峰保留時間為30～36 分鐘，流速為每分鐘 0.5ml；檢測波長為 220nm；進樣體積 20μl。系統適用性要求 系統適用性溶液色譜圖中，人生長激素主峰與脫氨人生長激素峰之間的分離度應不小于 1.0，人生長激素主峰的拖尾因子應為 0.9～1.8。

測定法 取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的 2 倍。按面積歸一化法計算相關蛋白質含量。限度不得大于 6.0%。

3.1.3.2 高分子蛋白質

供試品溶液、色譜條件與系統適用性要求 見 3.1.4。

測定法 取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。保留時間小于主成分峰的峰均視為高分子蛋白質峰，按面積歸一化法計算高分子蛋白質含量。保留時間大于主成分峰的色譜峰忽略不計。

限度 不得大于 4.0%。 

3.1.3.3 電荷變異體

照毛細管電泳法（通則 0542）測定。對照品溶液 取人生長激素對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素1mg 的溶液。

系統適用性溶液 取人生長激素系統適用性對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

靈敏度溶液 取人生長激素對照品適量，加水定量稀釋成每 1ml 含人生長激素 20μg 的溶液。

供試品溶液 取本品，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

磷酸鹽緩沖液 取磷酸氫二銨 13.2g，加水 1000ml 使溶解，用磷酸調 pH 至 6.0，過濾。

電泳條件 經預處理 [依次用 1mol/L 氫氧化鈉溶液（配制后置玻璃瓶中存放 24 小時以上）、水、磷酸鹽緩沖液沖洗 20、10、20 分鐘]的未涂層熔融石英毛細管（有效長度至少 70cm，內徑 50μm），毛細管柱溫 30℃；樣品盤溫度 4~8℃；進樣前，依次用 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液（配制后置玻璃瓶中存放 24 小時以上）、水、磷酸鹽緩沖液沖洗毛細管 2、3、6 分鐘；進樣時，在壓力或真空下進樣至少 5 秒，然后進樣磷酸鹽緩沖液 1 秒。以磷酸鹽緩沖液作為電極液，電泳電壓為 217V/cm；檢測波長 200nm。可根據所用毛細管的長度和儀器種類，調整毛細管預處理程序和進樣前沖洗程序；為滿足系統適用性要求，進樣時間和壓力可適當調整。 

系統適用性要求 系統適用性溶液圖譜應與人生長激素系統適用性對照品說明書中所附圖譜相似，參考附圖進行峰歸屬和峰面積積分，脫酰胺組分峰（I4，通常以峰簇形式出現，相對主峰保留時間約為 1.02~1.11）與主峰之間應能檢出 I3 峰，I3 峰與主峰的分離度應不小于 1.5；靈敏度溶液圖譜中，主峰信噪比應不低于 10。 

測定法 取供試品溶液進樣，記錄電泳圖至主成分峰遷移時間的 2 倍。在供試品溶液電泳圖中，按校正峰面積（峰面積與遷移時間之比）歸一化法計算總電荷變異體含量。限度 應不得過 10.0%。

3.1.3.4 宿主菌 DNA 殘留量

依法測定（通則 3407）或采用經驗證并批準的其他適宜方法，每 1mg 人生長激素中含宿主菌 DNA 殘留量不得過 1.5ng。

3.1.3.5 宿主菌蛋白質殘留量

依法檢查（通則 3412、3414）或采用經驗證并批準的其他適宜方法，每 1mg 人生長激素中宿主菌蛋白質殘留量不得過 10ng。

3.1.3.6 殘余抗生素活性

如在生產（例如種子液制備）中使用抗生素，應依法檢查（通則 3408），或按照經驗證并批準的方法檢查，不應有殘余氨芐西林或其他抗生素活性。

3.1.3.7 細菌內毒素

依法檢查（通則 1143），每 1mg 人生長激素中含內毒素的量應小于 5.0EU。

3.1.4 含量

照分子排阻色譜法（通則 0514）測定。

試劑 （1）0.063mol/L 磷酸鹽緩沖液 取無水磷酸氫二鈉 5.18g、磷酸二氫鈉 3.65g，加水 950ml，用磷酸或氫氧化鈉試液調節 pH 值至 7.0，用水制成 1000ml，搖勻。

（2）0.025 mol/L 磷酸鹽緩沖液 取 0.063mol/L 磷酸鹽緩沖液 100ml，用水稀釋至250ml，必要時調 pH 值至 7.0。 

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液溶解并制成每1ml 中約含 1.0mg 的溶液。 

供試品溶液 取人生長激素原液適量，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液稀釋并制成每1ml 中約含人生長激素 1.0mg 的溶液。

 系統適用性溶液 取人生長激素單體-二聚體混合物對照品適量，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液溶解并制成每 1ml 中約含 1.0mg 的溶液。

 色譜條件 以適合分離質量為 5000-60000Da 球狀蛋白的親水改性硅膠為填充劑；以異丙醇-0.063mol/L 磷酸鹽緩沖液（3:97）為流動相；流速為每分鐘 0.6ml；檢測波長為214nm；進樣體積 20μl。 

系統適用性要求 系統適用性色譜圖中，人生長激素單體峰與二聚體峰之間的分離度應符合要求。 

測定法 取供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算。

3.1.5 比活性

依法測定(通則 3537)，按下式計算結果，每 1mg 人生長激素的活性不得少于 2.0 IU。供試品生物學活性（IU/ml）=標準品生物學活性(IU/ml)×供試品相對效價×Ds/Dr式中：Ds 為供試品預稀釋倍數；Dr 為標準品預稀釋倍數。供試品比活性（IU/mg）=供試品生物學活性（IU/ml）/供試品的人生長激素含量（mg/ml）。

3.2 半成品檢定

如需對原液進行稀釋或加入其他輔料制成半成品，應確定半成品的質量控制要求，應按如下檢項或經批準的檢項進行。

3.2.1 細菌內毒素

依法檢查（通則 1143），每 1mg 人生長激素含細菌內毒素的量應小于 5.0EU。

3.2.2 無菌

依法檢查（通則 1101 薄膜過濾法），應符合規定。

3.3 成品檢定

3.3.1 外觀

本品為無色澄清或微濁液體。

3.3.2 鑒別

3.3.2.1 反相色譜法

供試品溶液、對照品溶液與色譜條件 見 3.3.3.3 相關蛋白項下。

測定法 取本品，按 3.3.3.3 項相關蛋白質項下色譜條件試驗。

結果判定 供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。

3.3.2.2 毛細管電泳法

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg的溶液。

供試品溶液 取本品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液，該溶液與對照品溶液等體積混合，搖勻。

電泳條件 同 3.1.3.3 項下電泳條件。

測定法 取供試品溶液，按 3.1.3.3 項下的條件試驗，記錄電泳圖。

結果判定 供試品溶液電泳圖中，人生長激素主峰應為無分裂單一峰。

3.3.3 檢查

3.3.3.1 pH 值

取本品，依法測定（通則 0631），pH 值應為 5.5～6.5。

3.3.3.2 溶液的澄清度與顏色

取本品，用水制成每 1ml 中約含人生長激素 1.6mg 的溶液（規格低于該濃度的成品可不經稀釋直接作為供試品溶液），依法檢查（通則 0901 第一法和 0902 第一法），溶液應澄清無色；如顯渾濁，與 2 號濁度標準液比較，不得更濃。

3.3.3.3 相關蛋白質

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗。

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，加水制成每 1ml 中含人生長激素 1.6mg 的溶液。

供試品溶液 取本品，用 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液稀釋成每 1ml 中含人生長激素1.6mg 的溶液；規格低于該濃度的成品可不經稀釋直接作為供試品溶液。

系統適用性溶液 取 30%過氧化氫溶液 5μl，加水稀釋至 100ml，作為溶劑。另取人生長激素對照品適量，用溶劑制成每 1ml 中含人生長激素 1.6mg 的溶液，放置 1～7 天，以得到適量的甲硫氨酸氧化形式。 

空白溶液 照成品處方制備不含人生長激素的輔料溶液。

對照品溶液、供試品溶液、系統適用性溶液、空白溶液均于 2～8℃保存，24 小時內使用。

色譜條件 采用末端封尾的十八烷基硅烷鍵合硅膠填充的色譜柱（4.0mm×250mm、7μm、孔徑 100nm），柱溫為 45℃；取硫酸銨 82.6g 和磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）34.5g，加水 2950ml 溶解后再加入高氯酸 25.0ml 和乙腈 2000ml，混勻后加水稀釋至 5000ml，作為流動相 A；乙腈-水（4:1）為流動相 B，按下表進行梯度洗脫；流速為每分鐘 1.0ml；檢測波長為 215nm；進樣體積 20μl。

系統適用性要求 調節流動相比例，使系統適用性色譜圖中人生長激素主峰保留時間約為 40 分鐘；在系統適用性色譜圖中，[MetO14]人生長激素與人生長激素主峰的相對保留時間約為 0.9。 [MetO14] 人生長激素色譜峰的峰高與該峰和人生長激素主峰之間的峰谷高之比應不低于 2.0。在空白溶液色譜圖中應無干擾峰。

測定法 取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在供試品溶液記錄的色譜圖中，扣除空白溶液相對應的峰，除主峰外的其他峰均視為相關蛋白峰，按峰面積歸一化法計算相關蛋白質含量。限度 不得大于 10.0%。

3.3.3.4 電荷變異體

照毛細管電泳法（通則 0542）測定。

對照品溶液、系統適用性溶液、靈敏度溶液、磷酸鹽緩沖液 照 3.1.3.3 項下同法配制。

供試品溶液 取本品，用水溶解并稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

空白溶液 按制劑處方和供試品溶液中終濃度，制備不含人生長激素的輔料溶液。

電泳條件 同 3.1.3.3 項下電泳條件。系統適用性要求 除滿足 3.1.3.3 項下系統適用性要求外，在空白溶液記錄的電泳圖中，應無干擾峰。 

測定法 按 3.1.3.3 項下的條件試驗，忽略空白溶液峰，按校正峰面積（峰面積與遷

移時間之比）歸一化法計算總電荷變異體含量。

限度 不得過 25.0%。

3.3.3.5 高分子蛋白質

取本品，照 3.1.3.2 項下的方法試驗并計算。

限度 不得大于 4.0%。

3.3.3.6 裝量

依法檢查（通則 0102），應不低于標示量。

3.3.3.7 可見異物

依法檢查（通則 0904 第一法），應不得檢岀金屬屑、玻璃屑或最大粒徑超過 2mm纖維和塊狀物等明顯外來的可見異物。

3.3.3.8 不溶性微粒

依法檢查（通則 0903），每份容器中含 10μm 及 10μm 以上的微粒數不得過 6000 粒；含 25μm 及 25μm 以上的微粒數不得過 600 粒。

3.3.3.9 滲透壓摩爾濃度

依法測定（通則 0632），應符合經驗證并批準的標準。

3.3.3.10 無菌

依法檢查（通則 1101 薄膜過濾法），應符合規定。

3.3.3.11 細菌內毒素

依法檢查（通則 1143），每 1mg 人生長激素中含細菌內毒素的量應小于 5.0EU。

3.3.3.12 異常毒性

取本品，加氯化鈉注射液或滅菌注射用水制成 1ml 中約含人生長激素 1.6mg 的溶液（規格低于該濃度的成品可不經稀釋直接作為供試品溶液），依法檢查（通則 1141 小鼠試驗法），應符合規定。

3.3.3.13 抑菌劑

如在成品生產過程中使用防腐劑，應按照經驗證并批準的方法檢查，并符合規定。

3.3. 4 生物學活性

每年至少測定 1 次。依法測定（通則 3537），應為標準品的 70%～140%。

3.3.5 含量

供試品 取本品，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液制成每 1ml 中約含人生長激素 1.0mg的溶液。

對照品溶液、色譜條件、系統適用性要求與測定法 見 3.1.4 項。

限度 含人生長激素應為標示量的 90.0%～110.0%。

4 保存、運輸及有效期于 2～8℃避光、密閉保存和運輸。

5 使用說明

應符合生物制品分包裝及貯運管理（通則 0239）規定和批準的內容。