化學合成多肽藥物藥學研究技術指導原則

一、前言 多肽是由多個氨基酸通過酰胺鍵相連形成的化合物，可通過基因重組表達、生物提取、化學合成等方法制備。化學合成多肽藥物在制備方法、結構確證、質量研究等方面均存在自身特性，不能簡單的將其歸屬于小分子化學藥物或生物制品。同時，許多國內外指導性文件均明確不涵蓋多肽類藥物。本指導原則在2007年版《合成多肽藥物藥學研究技術指導原則》的基礎上，對合成多肽藥物藥學研究方面所涉及的特殊問題進行分析，結合國內外對多肽藥物研究和評價的實踐經驗，提出化學合成多肽藥物藥學研究的一般性技術要求，供業界參考執行。

本指導原則的起草是基于對多肽藥物的當前認知，隨著多肽藥物研究技術的提高和相關法規的完善，本指導原則將不斷修訂。本指導原則僅適用于采用化學合成法制備的多肽藥物。

二、原料藥制備工藝

（一）合成工藝的選擇根據反應載體不同，多肽原料藥的合成工藝主要包括液相合成法和固相合成法。根據肽鍵形成的順序，多肽原料藥的合成工藝主要包括線性合成法和片段縮合合成法。在合成 工藝選擇時應結合目標肽鏈的長短和氨基酸特性綜合考慮。需要注意的是，在多肽合成過程中會產生一些與目標肽鏈結構類似的雜質，如缺失肽、插入肽、錯結肽和差向肽等，諸如此類雜質的產生和蓄積會增加多肽成品提純的難度，合成工藝選擇時應避免或減少此類肽相關雜質的產生。以固相合成工藝為例，在工藝開發時應關注氨基酸保護脫保護策略、縮合劑選擇依據、氨基酸偶聯、裂解、純化、肽鏈修飾和富集凍干等研究內容。對于多肽純化方法的選擇，需要綜合考慮肽鏈長短、極性和荷電性以及粗品純度等因素，對純化前后樣品進行質量對比研究，證明擬采用的純化方式可有效起到提純效果。在開發凍干工藝時需充分考慮凍干條件的合理性，提供詳細的凍干工藝參數，并對凍干前后樣品進行質量對比研究。過濾等工藝中若存在極端pH值或有機溶劑條件，還需考慮進行必要的濾膜相容性研究。

（二）物料及控制根據 ICH Q11 及其問答文件等相關要求，在多肽原料藥的合成工藝中，保護氨基酸或肽段的質量狀況直接影響多肽藥物質量，應定義為關鍵起始物料。保護氨基酸的質量控制項目一般應包括性狀、比旋度、有關物質、手性異構體、殘留溶劑、含量測定等。

由于保護氨基酸中的雜質可能伴隨化學反應而發生雜質傳遞和轉化，繼而增加多肽藥物的提純難度，應增加必要的雜質研究，同時制定合理的控制限度。應結合保護氨基酸的合成工藝確定雜質譜組成，以 Fmoc 保護氨基酸為例，常見的雜質包括保護不完全氨基酸、手性異構體、同分異構體、二肽衍生物、β-丙氨酸雜質等。應開發出能有效檢出各潛在雜質的分析方法，并對分析方法進行必要的方法學驗證，充分證明所采用方法的可行性。保護氨基酸合成過程中如果使用了某些溶劑，如乙酸乙酯、乙酸等，需要對其殘留進行合理控制，以避免在后續偶聯反應中出現“封端”現象。   Fmoc 保護氨基酸中常見的雜質 雜質 描述 保護不完全氨基酸 游離氨基酸（未保護）或部分保護的氨基酸 手性異構體 含有手性中心的氨基酸可能存在，如 D-氨基 酸中存在 L-氨基酸 二肽衍生物 如 Fmoc-Leu-OH 中存在 Fmoc-Leu-Leu-OH β-丙氨酸（Ala）雜質 在 使 用 9- 芴甲基 N- 琥 珀 酰 亞 胺 碳 酸 酯 （Fmoc-OSu）時，可能產生 Fmoc-β-Ala-OH 和 Fmoc-β-Ala-AA-OH 同分異構體 如亮氨酸（Leu）中存在異亮氨酸（Ile） 55 片段縮合合成法中，采用肽段作為起始物料，應提供肽段的合成工藝及必要的結構確證資料，應結合多肽終產品質量標準制定肽段的質控項目，如鑒別、純度和含量測定等。肽段有關物質考察應重點關注可能引入到終產品中的其他短肽殘留情況，建立相應的雜質控制策略，并提供必要的方法學驗證資料。同時，也應該提供肽段的穩定性研究資料。固相合成中，樹脂作為必需物料，其質量可直接影響多肽藥物質量，應提供樹脂的來源、質量標準和檢驗報告，并對樹脂的摩爾取代系數、在不同溶劑中的膨脹系數、所用合成條件下的穩定性情況等予以說明。由于缺乏有效的表征手段和針對性的質控方法，不推薦與肽鏈 C 端氨基酸相連的樹脂作為起始物料。

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