重組腺相關(guān)病毒載體類體內(nèi)基因治療產(chǎn)品
申報(bào)上市藥學(xué)共性問題與解答（征求意見稿）
國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心
2025 年 3月
目錄
2、純度檢測方法選擇和標(biāo)準(zhǔn)限度制定的一般考慮
4、空殼率檢測方法選擇和標(biāo)準(zhǔn)限度制定的一般考慮
6、可復(fù)制型腺病毒（Replication Competent AAV, rcAAV）檢測方法選擇和標(biāo)準(zhǔn)限度制定的一般考慮
重組腺相關(guān)病毒（Recombinant adeno-associated virus，rAAV）載體因其理化性質(zhì)穩(wěn)定，致病性、整合風(fēng)險(xiǎn)低，外源基因表達(dá)持久等顯著優(yōu)勢，已成為基因治療領(lǐng)域內(nèi)重要的病毒載體之一。目前全球rAAV產(chǎn)品研發(fā)進(jìn)展迅速，境內(nèi)外開展臨床試驗(yàn)的rAAV產(chǎn)品數(shù)量增長迅速，并且批準(zhǔn)上市的rAAV產(chǎn)品數(shù)量逐漸增加。
rAAV產(chǎn)品創(chuàng)新程度高，生產(chǎn)工藝路線的復(fù)雜性導(dǎo)致生產(chǎn)工藝控制面臨挑戰(zhàn)，其質(zhì)量研究和控制也存在諸多難點(diǎn)，上述問題對rAAV產(chǎn)品上市藥學(xué)評價(jià)和后續(xù)審評帶來一定挑戰(zhàn)。本文根據(jù)現(xiàn)階段的科學(xué)認(rèn)知、行業(yè)實(shí)踐和審評經(jīng)驗(yàn)，對不同生產(chǎn)工藝的外源病毒因子風(fēng)險(xiǎn)控制策略、質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定過程中的共性問題提出一般性技術(shù)要求，以供申請人參考。
本文件僅反映監(jiān)管部門當(dāng)前對rAAV產(chǎn)品工藝和質(zhì)量相關(guān)共性問題的監(jiān)管考慮，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和監(jiān)管知識經(jīng)驗(yàn)的積累，相關(guān)內(nèi)容將不斷完善與更新。
問題：針對rAAV產(chǎn)品不同生產(chǎn)工藝開展外源病毒因子檢測和控制的要求？
答復(fù)：
目前rAAV產(chǎn)品按照生產(chǎn)工藝中是否使用輔助病毒分為兩類，一類是輔助病毒非依賴性產(chǎn)品，比如使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系，或使用穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系，或通過重組桿狀病毒等生產(chǎn)的rAAV產(chǎn)品；第二類是輔助病毒依賴性產(chǎn)品，比如生產(chǎn)工藝中需要使用輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒等）生產(chǎn)的rAAV產(chǎn)品。不同類型生產(chǎn)工藝，可能引入的病毒污染風(fēng)險(xiǎn)程度不同，因而對于外源病毒因子控制策略有所不同。因此，建議深入分析不同生產(chǎn)工藝病毒污染的潛在來源，并根據(jù)工藝特點(diǎn)、產(chǎn)品特點(diǎn)采用多階段控制策略以控制整體風(fēng)險(xiǎn)。
采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞系或穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細(xì)胞系生產(chǎn)的rAAV產(chǎn)品，病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)可能來自細(xì)胞系（即生產(chǎn)用細(xì)胞），生產(chǎn)過程中使用的動物/人源材料，也可能來自生產(chǎn)過程中的偶然引入。因此，該生產(chǎn)工藝的rAAV產(chǎn)品外源病毒因子風(fēng)險(xiǎn)控制策略建議如下：a、建議按照ICH、《中國藥典》等相關(guān)技術(shù)指南要求對主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、體外限傳代次細(xì)胞進(jìn)行全面檢定，結(jié)合細(xì)胞來源、傳代或改造歷史、建庫過程中使用的原材料情況等進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估后確定外源病毒因子檢測種類。b、對動物/人源材料，應(yīng)結(jié)合其來源、生產(chǎn)工藝等開展特異性外源病毒檢測，病毒檢測種類應(yīng)全面反映可能引入的外源病毒，檢測方法應(yīng)能有效檢出特異性外源病毒。c、建議在適宜的生產(chǎn)步驟進(jìn)行外源病毒的檢測，作為工藝過程控制項(xiàng)目并設(shè)立合理的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，通常選擇的樣品是未處理的病毒收獲液，具體檢測方法可參考ICH、《中國藥典》等相關(guān)技術(shù)指南的要求。d、根據(jù)a-c控制策略和風(fēng)險(xiǎn)評估情況，如果在細(xì)胞庫檢定和未處理的病毒收獲液中未發(fā)現(xiàn)除目標(biāo)重組腺相關(guān)病毒產(chǎn)品以外的其他病毒、病毒樣顆粒（Virus-like particles, VLP）或逆轉(zhuǎn)錄病毒樣顆粒（Retrovirus-like particle, RVLP），則建議使用非特異“模型”病毒開展病毒去除/滅活驗(yàn)證，以評估現(xiàn)有生產(chǎn)工藝步驟對非特異性“模型”病毒的清除能力。e、根據(jù)a-d檢測結(jié)果和風(fēng)險(xiǎn)評估認(rèn)為外源病毒因子污染風(fēng)險(xiǎn)可控，則無需評估每個(gè)劑量中病毒顆粒量，也無需對原液/純化后產(chǎn)品進(jìn)行外源病毒檢測。
采用桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系生產(chǎn)的rAAV產(chǎn)品，病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)可能來自包裝/生產(chǎn)用細(xì)胞以及病毒種子批，生產(chǎn)過程中使用的動物/人源材料，也可能來自生產(chǎn)過程中偶然的引入。因此，該生產(chǎn)工藝的rAAV產(chǎn)品外源病毒因子風(fēng)險(xiǎn)控制策略建議如下：a、包裝/生產(chǎn)用細(xì)胞、動物/人源材料外源病毒的控制在參見瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞系或穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細(xì)胞系生產(chǎn)的rAAV產(chǎn)品 “a-b”所述要求的基礎(chǔ)上，還應(yīng)考慮對昆蟲細(xì)胞庫增加彈狀病毒、螺原體等項(xiàng)目的檢定。b、病毒種子批的檢定項(xiàng)目應(yīng)符合《中國藥典》或其他通行技術(shù)指導(dǎo)原則的相關(guān)要求，并根據(jù)病毒種子批建立的特定情況，以及對病毒種子相關(guān)特征的評估設(shè)定相應(yīng)的檢定項(xiàng)目。由于重組桿狀病毒本身可能對外源病毒因子傳統(tǒng)檢測方法（體外法、體內(nèi)法）產(chǎn)生干擾，建議對病毒種子中和后再進(jìn)行檢測，如不能被充分中和，可在生產(chǎn)中設(shè)置對照細(xì)胞，采用對照細(xì)胞進(jìn)行外源病毒因子檢測。c、建議在適宜的生產(chǎn)步驟進(jìn)行外源病毒的檢測，作為工藝過程控制項(xiàng)目并設(shè)立合理的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。檢測樣品一般建議采用未處理的病毒收獲液，其檢測要求同病毒種子批。同時(shí)，應(yīng)在上市階段提供至少3批次未處理病毒收獲液的桿狀病毒和彈狀病毒定量檢測結(jié)果，用于評估生產(chǎn)工藝對上述病毒的清除率。d、由于包裝/生產(chǎn)用細(xì)胞中可能含有彈狀病毒，并且生產(chǎn)體系中引入了重組桿狀病毒，因此，應(yīng)考慮在生產(chǎn)工藝中設(shè)立病毒去除/滅活單元，并參考ICH Q5A的一般原則開展病毒去除/滅活驗(yàn)證研究。原則上，病毒清除驗(yàn)證研究應(yīng)使用已鑒定的病毒，如果不能使用已鑒定的病毒，則應(yīng)使用“相關(guān)”病毒或特異性“模型”病毒開展研究，如桿狀病毒和水泡性口炎病毒（可代表sf9細(xì)胞系中內(nèi)源性彈狀病毒），應(yīng)說明病毒選擇的依據(jù)。建議評價(jià)特定的工藝步驟對特異性或非特異性“模型”病毒的去除/滅活效果，并評估整個(gè)生產(chǎn)工藝步驟對特異性“模型”病毒的總體清除效果。常見的病毒去除/滅活步驟通常包括溶劑/去污劑處理、低pH孵育、柱層析、納濾等，建議基于風(fēng)險(xiǎn)評估考慮設(shè)立多種不同原理的病毒去除/滅活工藝步驟。e、對于原液/純化后產(chǎn)品的外源病毒檢測和控制，如果基于a-c全面檢測和控制，以及d已證明工藝步驟對相關(guān)病毒或特異性“模型”病毒具有穩(wěn)健的清除能力和效果，上市申請時(shí)，應(yīng)提供至少3批次中試規(guī)?；蛏虡I(yè)化生產(chǎn)規(guī)模原液/純化后產(chǎn)品的殘留重組桿狀病毒和彈狀病毒檢測結(jié)果的代表性數(shù)據(jù)，檢測方法應(yīng)選擇特異性和靈敏度較高的合適方法。否則，應(yīng)對每個(gè)批次原液/純化后產(chǎn)品進(jìn)行殘留桿狀病毒或彈狀病毒的檢測。
采用腺病毒、單純皰疹病毒等輔助病毒生產(chǎn)的rAAV產(chǎn)品，病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)可能來自包裝/生產(chǎn)用細(xì)胞以及病毒種子批，生產(chǎn)過程中使用的動物/人源材料，也可能來自生產(chǎn)過程中偶然的引入。因此，該生產(chǎn)工藝的rAAV產(chǎn)品外源病毒因子風(fēng)險(xiǎn)控制策略建議如下：a、包裝/生產(chǎn)用細(xì)胞、動物/人源材料外源病毒的控制參見瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞系或穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細(xì)胞系生產(chǎn)的rAAV產(chǎn)品 “a-b”所述要求。b、病毒種子批的檢定項(xiàng)目應(yīng)符合《中國藥典》或其他通行技術(shù)指導(dǎo)原則的相關(guān)要求，并根據(jù)病毒種子批建立的特定情況，以及對病毒種子相關(guān)特征的評估設(shè)定相應(yīng)的檢定項(xiàng)目。由于輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒等）本身可能對外源病毒因子傳統(tǒng)檢測方法（體外法、體內(nèi)法）產(chǎn)生干擾，建議對病毒種子中和后再進(jìn)行檢測，如不能被充分中和，可在生產(chǎn)中設(shè)置對照細(xì)胞，采用對照細(xì)胞進(jìn)行外源病毒因子檢測。c、建議在適宜的生產(chǎn)步驟進(jìn)行外源病毒的檢測，作為工藝過程控制項(xiàng)目并設(shè)立合理的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。檢測樣品一般建議采用未處理的病毒收獲液，其檢測要求同病毒種子批。同時(shí)，應(yīng)在上市階段提供至少3批次未處理病毒收獲液的輔助病毒定量檢測結(jié)果，用于評估生產(chǎn)工藝對輔助病毒的清除率。d、由于生產(chǎn)過程中使用了輔助病毒，因此，應(yīng)考慮在生產(chǎn)工藝中設(shè)立病毒去除/滅活單元，并參考ICH Q5A的一般原則開展病毒去除/滅活驗(yàn)證研究。原則上，病毒清除驗(yàn)證研究應(yīng)使用已鑒定的病毒，如果不能使用已鑒定的病毒，則應(yīng)使用“相關(guān)”病毒或特異性“模型”病毒開展研究，如腺病毒、皰疹病毒等，應(yīng)說明病毒選擇的依據(jù)。建議評價(jià)特定的工藝步驟對特異性或非特異性“模型”病毒的去除/滅活效果，并評估整個(gè)生產(chǎn)工藝步驟對特異性“模型”病毒的總體清除效果。常見的病毒去除/滅活步驟通常包括溶劑/去污劑處理、低pH孵育、柱層析、納濾等，建議基于風(fēng)險(xiǎn)評估考慮設(shè)立多種不同原理的病毒去除/滅活工藝步驟。e、對于原液/純化后產(chǎn)品的外源病毒檢測和控制，如果基于a-c全面檢測和控制，以及d已證明工藝步驟對相關(guān)病毒或特異性模型病毒有穩(wěn)健的清除能力和效果，則建議上市申請時(shí)，應(yīng)提供至少3批次中試規(guī)?；蛏虡I(yè)化生產(chǎn)規(guī)模原液/純化后產(chǎn)品的殘留輔助病毒檢測結(jié)果的代表性數(shù)據(jù)，檢測方法應(yīng)選擇特異性高和靈敏度高的合適方法。否則，應(yīng)對每個(gè)批次的原液/純化后產(chǎn)品進(jìn)行殘留輔助病毒的檢測。
問題（1）：rAAV產(chǎn)品純度檢測時(shí)，對使用CE-SDS方法或SDS-PAGE方法選擇的一般考慮
答復(fù)：
CE-SDS方法和SDS-PAGE方法均可用于rAAV產(chǎn)品的純度研究，以上方法是基于在變性條件下蛋白與SDS結(jié)合形成帶負(fù)電的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物，這些復(fù)合物在電場作用下根據(jù)分子量大小進(jìn)行分離，是目前蛋白質(zhì)純度檢測比較常見的方法。其中， CE-SDS方法在分離度、精密度、穩(wěn)健性等方面優(yōu)于SDS-PAGE方法，隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，新的更優(yōu)的檢測方法也可能逐步應(yīng)用，因此，鼓勵優(yōu)先采用靈敏度和準(zhǔn)確度較高的檢測方法用于產(chǎn)品純度檢測。如在臨床期間發(fā)生方法的變更，建議根據(jù)方法變更情況評估綜合風(fēng)險(xiǎn)，開展必要的變更后方法的全面驗(yàn)證并對變更前后方法進(jìn)行橋接研究，應(yīng)確保變更后方法對產(chǎn)品質(zhì)量的控制能力與變更前方法相當(dāng)或更優(yōu)。變更前后方法檢測結(jié)果存在定差異時(shí)，建議盡可能采用變更后方法對既往臨床試驗(yàn)用代表性批次進(jìn)行重新檢測，積累批次數(shù)據(jù)，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。
問題（2）： rAAV產(chǎn)品單體和聚集體含量是否必須納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)？
答復(fù)：
由于早期研發(fā)階段對產(chǎn)品的認(rèn)知尚淺，建議盡可能采用多種技術(shù)手段或方法對產(chǎn)品開展全面的表征研究。目前用于檢測rAAV產(chǎn)品單體和聚集體的方法較多，比如SEC-HPLC/MALS、AUC、DLS等，考慮到單體和聚集體含量可反映生產(chǎn)工藝的穩(wěn)健性和產(chǎn)品質(zhì)量特性，因此，建議開展rAAV產(chǎn)品單體和聚集體的質(zhì)量研究，并納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。臨床試驗(yàn)階段建議持續(xù)收集多個(gè)批次rAAV產(chǎn)品單體和聚集體的質(zhì)量檢測數(shù)據(jù)，以及穩(wěn)定性期考察數(shù)據(jù)的變化情況，合理擬定單體和聚集體的標(biāo)準(zhǔn)限度。
問題（3）：rAAV產(chǎn)品特征性衣殼蛋白（VP1、VP2、VP3）控制策略的一般考慮
答復(fù)：
對于rAAV產(chǎn)品，VP1、VP2、VP3含量差異較大，通常VP1和VP2含量較低，VP3含量較高，其中某些血清型的rAAV產(chǎn)品含有部分VP3分子變體，因此，對于特征性衣殼蛋白（VP1、VP2、VP3、）以及VP3分子變體的控制策略，建議結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)、分子設(shè)計(jì)、受工藝影響的程度以及對安全性、有效性、質(zhì)量可控性的影響程度綜合考慮。必要時(shí)，除了對rAAV產(chǎn)品VP1+VP2+VP3總量進(jìn)行控制外，還需對VP3分子變體含量進(jìn)行監(jiān)測，根據(jù)其對病毒結(jié)構(gòu)或功能影響的風(fēng)險(xiǎn)評估進(jìn)行單獨(dú)控制。
問題（1）：rAAV產(chǎn)品基因組滴度檢測時(shí)，使用qPCR方法或d(d)PCR方法選擇的一般考慮
答復(fù)：
d(d)PCR方法相比qPCR方法具有更好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，且該方法是對基因拷貝數(shù)的絕對定量，不依賴標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此，該方法具有較好的靈敏度和準(zhǔn)確度。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，新的更優(yōu)的檢測方法也可能逐步應(yīng)用，因此，鼓勵優(yōu)先采用靈敏度和準(zhǔn)確度較高的檢測方法用于產(chǎn)品基因組滴度檢測。
問題（2）：qPCR方法和d(d)PCR方法檢測結(jié)果存在的差異？如何進(jìn)行橋接和結(jié)果校準(zhǔn)？
答復(fù)：
隨著產(chǎn)品臨床試驗(yàn)進(jìn)展的不斷推進(jìn)，可能會發(fā)生基因組滴度檢測方法的變更，鑒于基因組滴度對于確保產(chǎn)品劑量準(zhǔn)確性及安全性至關(guān)重要，如擬在臨床試驗(yàn)期間變更檢測方法，建議盡可能在早期臨床試驗(yàn)階段進(jìn)行方法變更，同時(shí)根據(jù)方法變更情況綜合評估風(fēng)險(xiǎn)，開展必要的變更后方法的全面驗(yàn)證并對變更前后方法進(jìn)行橋接研究，應(yīng)確保變更后方法對產(chǎn)品質(zhì)量的控制能力與變更前方法相當(dāng)或更優(yōu)。由于qPCR方法和d(d)PCR方法在檢測原理、引物設(shè)計(jì)等方面存在差異，不同檢測方法的檢測結(jié)果可能存在差異，建議盡可能采用變更后方法對既往臨床試驗(yàn)用代表性批次進(jìn)行重新檢測，積累批次數(shù)據(jù)，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。
問題（1）：目前rAAV產(chǎn)品常見的空殼率檢測方法包括AUC方法、IE-HPLC方法、SEC-MALS方法等，對于不同檢測方法作為表征研究或質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的一般考慮
答復(fù)：
IE-HPLC方法和SEC-MALS方法平臺成熟，分析速度快，通量高，但不能完全區(qū)分部分包裝病毒和實(shí)心病毒。相比IE-HPLC、SEC-MALS方法，AUC法對完整包裝病毒、部分包裝病毒和空殼病毒的分離效果方面較好，實(shí)測空殼率與理論空殼率差異較小，在行業(yè)內(nèi)也得到比較廣泛的認(rèn)可和應(yīng)用。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，新的更優(yōu)的檢測方法也可能逐步應(yīng)用，因此，鼓勵優(yōu)先采用靈敏度和準(zhǔn)確度較高的檢測方法用于空殼率檢測和控制。
問題（2）：對于rAAV產(chǎn)品空殼率標(biāo)準(zhǔn)限度制定的一般考慮
對于空殼率標(biāo)準(zhǔn)限度的擬定，建議基于產(chǎn)品特點(diǎn)、生產(chǎn)工藝和既往歷史批次檢測數(shù)據(jù)、給藥方式和劑量，以及與臨床安全性和有效性的相關(guān)性等因素綜合考慮，應(yīng)特別關(guān)注空殼率檢測方法變更情況以及變更前后檢測數(shù)據(jù)的橋接研究情況，基于以上整體因素考慮開展充分的研究，并基于充分研究數(shù)據(jù)證明標(biāo)準(zhǔn)限度制定的合理性。
5、效價(jià)檢測方法的一般考慮
答復(fù)：
效價(jià)作為反映產(chǎn)品生物學(xué)活性的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，不僅包括檢測產(chǎn)品本身的效價(jià)，如感染滴度，還應(yīng)考慮其遞送基因表達(dá)產(chǎn)物的效價(jià)，如表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)活性。在早期臨床試驗(yàn)階段，建議根據(jù)產(chǎn)品設(shè)計(jì)和對產(chǎn)品作用機(jī)制的理解，初步建立生物學(xué)活性分析方法，如對外源目的基因表達(dá)產(chǎn)物正確性的確認(rèn)，目的基因的表達(dá)水平，表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)活性等研究。由于作用機(jī)制的差異，對于開發(fā)難度較大的表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)活性分析方法，可考慮在臨床試驗(yàn)期間逐步建立并完善，但建議在其他研究水平進(jìn)行質(zhì)量控制（如表達(dá)量等），必要時(shí)可與監(jiān)管機(jī)構(gòu)進(jìn)行溝通。隨著臨床試驗(yàn)不斷推進(jìn)，建議持續(xù)完善效價(jià)相關(guān)的關(guān)鍵質(zhì)量屬性的確認(rèn)和效價(jià)控制策略，并盡可能建立關(guān)鍵質(zhì)量屬性與效價(jià)之間的相關(guān)性。產(chǎn)品上市申請階段，效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)限度應(yīng)基于生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)以及產(chǎn)品開發(fā)和臨床研究批次積累的數(shù)據(jù)進(jìn)行設(shè)定，綜合考慮關(guān)鍵臨床試驗(yàn)批次數(shù)據(jù)、方法變異度以及穩(wěn)定性期間的變化情況進(jìn)行修訂和完善。
通常情況下，不同rAAV產(chǎn)品發(fā)揮作用的機(jī)制可能不同，并且一些產(chǎn)品可能含有多種活性成分和/或多種生物學(xué)活性，對于某些產(chǎn)品可能需要測定每種活性成分的濃度和效價(jià)，某些產(chǎn)品可能采用一種生物學(xué)測定方法可以評估或反映所有活性成分效價(jià)。因此，不同產(chǎn)品效價(jià)檢測方法應(yīng)結(jié)合具體情況具體分析。
采用生物學(xué)測定方法作為效價(jià)檢測方法可能受多種因素影響，比如不同儀器之間變異性影響，不同分析人員變異性影響，以及生物學(xué)測定方法中使用的檢定用細(xì)胞、生物試劑等變異性影響。因此，建議盡可能識別可能影響效價(jià)檢測方法的潛在影響因素，并充分評估這些因素對方法準(zhǔn)確度、精密度等影響。同時(shí)，為進(jìn)一步降低上述因素變異性對效價(jià)測定結(jié)果的影響，可考慮建立對照品/標(biāo)準(zhǔn)品，或者對每個(gè)待測樣品進(jìn)行多次獨(dú)立分析運(yùn)行并報(bào)告平均值進(jìn)行報(bào)告。
如果產(chǎn)品在研發(fā)期間發(fā)生變更，應(yīng)結(jié)合變更內(nèi)容、變更程度及變更風(fēng)險(xiǎn)提供充分的風(fēng)險(xiǎn)評估和研究數(shù)據(jù)，以證明該變更不會對產(chǎn)品的效價(jià)產(chǎn)生不利影響。
問題（1）：rcAAV檢測方法選擇的考慮？
答復(fù)：
rAAV產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，由于載體基因組、Rep/Cap基因以及ITR序列可能發(fā)生同源和/或非同源重組，可能會形成具有復(fù)制能力和潛在感染性的野生型病毒，即復(fù)制型腺相關(guān)病毒（Replication Competent AAV, rcAAV）。研究顯示， rcAAV在輔助病毒（例如腺病毒Ad5）存在條件下可以復(fù)制擴(kuò)增，可能影響轉(zhuǎn)基因表達(dá)或誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，是一種具有潛在風(fēng)險(xiǎn)的工藝相關(guān)雜質(zhì)。因此，需要對rAAV產(chǎn)品進(jìn)行rcAAV的檢測。為了提高檢測方法靈敏度，建議采用細(xì)胞培養(yǎng)法與PCR相結(jié)合的方法。
問題（2）：rcAAV檢測方法中陽性病毒選擇的考慮？
答復(fù)：
對于rcAAV檢測方法中陽性病毒的選擇，建議選擇與產(chǎn)品血清型一致的陽性病毒作為對照病毒。陽性對照病毒可以購買商業(yè)化相應(yīng)血清型陽性病毒，也可以自行構(gòu)建，但無論通過何種途徑獲得，均應(yīng)在申報(bào)資料中提供陽性病毒的來源、制備工藝、主要功能元件及感染滴度標(biāo)定的詳細(xì)資料，并關(guān)注陽性病毒在貯存期間的滴度穩(wěn)定性。
問題（3）：rcAAV檢測方法中共培養(yǎng)細(xì)胞選擇的考慮？
答復(fù)：
對于培養(yǎng)法中所使用共培養(yǎng)細(xì)胞的選擇，考慮到不同血清型病毒對不同細(xì)胞的感染特性或感染能力不同，鼓勵盡可能基于產(chǎn)品特性篩選易感的細(xì)胞系，其可以通過商業(yè)化購買，也可以自行構(gòu)建，但無論通過何種途徑獲得，均應(yīng)關(guān)注細(xì)胞的傳代方式、培養(yǎng)條件等對方法檢測靈敏度的影響。
共培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)按照《中國藥典》檢定用細(xì)胞相關(guān)要求提供全面的研究資料，如合法來源證明性文件、細(xì)胞庫建庫過程資料、細(xì)胞庫檢定研究資料等。
問題（4）：rcAAV標(biāo)準(zhǔn)限度如何制定？
答復(fù)：
rcAAV標(biāo)準(zhǔn)限度應(yīng)在上市階段結(jié)合方法驗(yàn)證結(jié)果、批次數(shù)據(jù)積累、臨床安全性和有效性等情況設(shè)定合理的標(biāo)準(zhǔn)限度。
問題（1）：rAAV產(chǎn)品中殘留DNA大小分布是否需要納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)？
答復(fù)：
對于殘留DNA片段大小的檢測與控制，建議在臨床試驗(yàn)階段對DNA片段大小進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測，積累多個(gè)批次數(shù)據(jù)，并關(guān)注不同DNA片段大小分布變化情況。同時(shí)，根據(jù)臨床期間積累數(shù)據(jù)情況開展充分的安全性評估，基于積累的數(shù)據(jù)和安全性評估情況綜合考慮，可不強(qiáng)制要求納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
問題（2）：rAAV產(chǎn)品中殘留DNA片段大小達(dá)不到現(xiàn)有指導(dǎo)原則＜200bp要求，如何考慮？
答復(fù)：
從產(chǎn)品安全性風(fēng)險(xiǎn)的角度考慮，建議通過工藝開發(fā)和優(yōu)化盡量降低殘留DNA片段大小，但考慮到目前大部分rAAV產(chǎn)品在現(xiàn)有的工藝水平下可能難以達(dá)到殘留DNA大?。?00bp的要求，建議結(jié)合具體品種類型，以及現(xiàn)有工藝對殘留DNA片段的去除能力等具體分析，通過開展更加充分的研究和安全性評估數(shù)據(jù)證明殘留DNA片段大小內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)限度擬定的合理性。同時(shí)，基于提高產(chǎn)品質(zhì)量，降低潛在安全性風(fēng)險(xiǎn)工藝相關(guān)雜質(zhì)水平的考慮，鼓勵申請人通過不斷優(yōu)化生產(chǎn)工藝盡可能降低>200bp殘留DNA片段的比例。
1. ICH Q5A(R2). Viral safety evaluation of biotechnology products derived from cell lines of human or animal origin. 2023.
2. NMPA. 體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則. 2022.
3. NMPA. 重組腺相關(guān)病毒載體類體內(nèi)基因治療產(chǎn)品臨床試驗(yàn)申請藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則. 2023.
4. 國家藥典委員會.《中華人民共和國藥典》(2020年版). 2020.
5. FDA. Potency tests for cellular and gene therapy products. 2011.
6. FDA. Potency assurance for cellular and gene therapy products (draft guidance for industry). 2023.
來源：CDE
原文下載:
《重組腺相關(guān)病毒載體類體內(nèi)基因治療產(chǎn)品申報(bào)上市藥學(xué)共性問題與解答（征求意見稿）》.docx
冀公網(wǎng)安備 13010802000997號
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