腺相關(guān)病毒載體基因治療產(chǎn)品非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則

一、概述

（一）前言

體內(nèi)基因治療產(chǎn)品一般選用適當(dāng)?shù)妮d體或轉(zhuǎn)染方式將外源基因（或基因編輯工具）導(dǎo)入人體，通過替代、補(bǔ)償、阻斷、修正特定基因以達(dá)到治療疾病的目的。腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus，AAV）載體因其理化性質(zhì)穩(wěn)定、致病性弱、整合風(fēng)險(xiǎn)低、目的基因表達(dá)持久等結(jié)構(gòu)和生物學(xué)方面的優(yōu)勢(shì)，成為體內(nèi)基因治療領(lǐng)域研究和應(yīng)用最廣泛的載體之一。

本指導(dǎo)原則所指 AAV 載體基因治療產(chǎn)品（以下簡稱為“AAV 載體產(chǎn)品”）是以 AAV 載體攜帶含目的基因的基因表達(dá)元件，通過目的基因在體內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)錄、翻譯，獲得目的蛋白并在體內(nèi)長期表達(dá)來發(fā)揮治療作用。該類產(chǎn)品的潛在風(fēng)險(xiǎn)分析時(shí)需考慮終產(chǎn)品、所采用的 AAV 載體、遞送的目的基因等，還需關(guān)注體內(nèi)長期存續(xù)和/或表達(dá)帶來的長期安全性風(fēng)險(xiǎn)。為規(guī)范和指導(dǎo) AAV 載體產(chǎn)品的非臨床研究和評(píng)價(jià)，在相關(guān)非臨床研究指導(dǎo)原則基礎(chǔ)上，基于現(xiàn)階段對(duì)于此類產(chǎn)品的科學(xué)認(rèn)知，制定本指導(dǎo)原則，提出非臨床研究和評(píng)價(jià)的要求。隨著技術(shù)的發(fā)展、認(rèn)知程度的深入和相關(guān)研究數(shù)據(jù)的積累，本指導(dǎo)原則將不斷完善和適時(shí)更新。

（二）適用范圍 

本指導(dǎo)原則中的 AAV 載體是指基于腺相關(guān)病毒的結(jié)構(gòu)、理化和生物學(xué)特性，經(jīng)設(shè)計(jì)和重組改造所形成的用于攜帶目的基因的病毒載體。本指導(dǎo)原則為此類 AAV 載體產(chǎn)品的非臨床研究提供技術(shù)指導(dǎo)和建議。對(duì)于攜帶基因編輯工具的 AAV 載體產(chǎn)品，其作用機(jī)制涉及對(duì)人體細(xì)胞基因組的編輯操作，現(xiàn)階段對(duì)此類產(chǎn)品的認(rèn)知有限，因此本指導(dǎo)原則不適用于此類產(chǎn)品。

二、總體考慮

（一）研究目的

非臨床研究是藥物開發(fā)的重要組成部分。AAV 載體產(chǎn)品非臨床研究的主要目的是：（1）對(duì)擬定的作用機(jī)制進(jìn)行概念驗(yàn)證，考察有效性潛力，明確其在擬定患者人群中使用的生物學(xué)合理性。通常包括：考察其攜帶的目的基因能否進(jìn)入預(yù)期的靶細(xì)胞并表達(dá)為具有生理學(xué)功能的蛋白產(chǎn)物、蛋白產(chǎn)物能否對(duì)擬定適應(yīng)癥起到治療作用等。（2）考察 AAV 載體產(chǎn)品在體內(nèi)的藥代特征，評(píng)估其生物分布、存續(xù)、脫落特征。（3）根據(jù)潛在風(fēng)險(xiǎn)因素，闡明毒性反應(yīng)特征，預(yù)測(cè)人體可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)，確定臨床監(jiān)測(cè)指標(biāo)，為制定臨床風(fēng)險(xiǎn)控制措施提供參考信息。

應(yīng)通過開展非臨床研究，收集用于獲益-風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的信息，以確定擬開發(fā)產(chǎn)品在目標(biāo)患者人群中預(yù)期具有合理的、可接受的獲益-風(fēng)險(xiǎn)比，同時(shí)為臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)和風(fēng)險(xiǎn)控制策略的制定以及產(chǎn)品上市提供支持性依據(jù)。

（二）基本原則

1. 具體問題具體分析

由于 AAV 載體產(chǎn)品的生物學(xué)復(fù)雜性，其非臨床研究和評(píng)價(jià)應(yīng)遵循“具體問題具體分析”的原則，綜合考慮導(dǎo)入的目的基因特性、AAV 載體生物學(xué)特征、研究模型的可行性/可獲得性、適應(yīng)癥/目標(biāo)患者群體、給藥途徑和給藥方案等多種因素。

2. GLP 要求

AAV 載體產(chǎn)品的非臨床安全性研究一般應(yīng)當(dāng)在經(jīng)過藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）認(rèn)證的機(jī)構(gòu)開展，并遵守 GLP。當(dāng)某些特殊情況下無法遵守 GLP 時(shí)，例如采用非常規(guī)動(dòng)物模型、在概念驗(yàn)證或生物分布試驗(yàn)中整合安全性檢測(cè)指標(biāo)、檢測(cè)某些特殊指標(biāo)等，應(yīng)最大限度地按 GLP 原則進(jìn)行試驗(yàn)，確保試驗(yàn)質(zhì)量和數(shù)據(jù)的完整性及可追溯性。

3. 隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)

試驗(yàn)應(yīng)遵循隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的原則。

（三）非臨床研究的重要關(guān)注點(diǎn)

1. 受試物

非臨床研究所用受試物應(yīng)能代表臨床擬用樣品。應(yīng)明確受試物質(zhì)量特性。若后續(xù)開發(fā)階段藥學(xué)方面發(fā)生變更，需評(píng)估變更帶來的影響，必要時(shí)開展變更前后樣品的非臨床橋接研究或開展新的非臨床研究。AAV 載體產(chǎn)品的終產(chǎn)品中，除擬發(fā)揮療效的活性成分外，通常還存在多種相關(guān)雜質(zhì)，如空殼病毒、部分包裝病毒、游離衣殼蛋白、游離核酸、DNA 錯(cuò)誤包裝等。活性成分與相關(guān)雜質(zhì)的含量及比例可能影響 AAV 載體產(chǎn)品發(fā)揮藥效作用或引起安全性風(fēng)險(xiǎn)的劑量水平，因此，整個(gè)非臨床和臨床開發(fā)過程中保持產(chǎn)品特性的一致性對(duì)于有效性和安全性至關(guān)重要。需要對(duì)產(chǎn)品的純度、雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)和控制。當(dāng)無法采用臨床擬用產(chǎn)品進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)而采用攜帶動(dòng)物源基因表達(dá)元件的替代 AAV 載體產(chǎn)品開展試驗(yàn)時(shí)，該替代產(chǎn)品應(yīng)與臨床擬用產(chǎn)品采用相似的生產(chǎn)工藝，并對(duì)可能影響有效性和安全性的關(guān)鍵質(zhì)量參數(shù)進(jìn)行對(duì)比研究，以評(píng)估替代產(chǎn)品與臨床擬用產(chǎn)品的相似性及其對(duì)非臨床數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)性的影響。

2. 動(dòng)物種屬/模型選擇

應(yīng)選擇相關(guān)動(dòng)物種屬/模型進(jìn)行非臨床體內(nèi)研究。動(dòng)物種屬/模型的選擇應(yīng)具有科學(xué)合理的依據(jù)。選擇相關(guān)動(dòng)物時(shí)需要考慮產(chǎn)品特性和臨床擬用情況，包括但不限于以下因素：

（1）AAV 載體在動(dòng)物中的感染敏感性、組織趨向性、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率及與人體的相似性；

（2）動(dòng)物對(duì) AAV載體攜帶的目的基因的轉(zhuǎn)錄和/或表達(dá)可行性及其表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)效應(yīng)與預(yù)期的人體效應(yīng)的相似性；

（3）動(dòng)物對(duì) AAV載體產(chǎn)品的免疫耐受性；

（4）動(dòng)物的解剖學(xué)和病理/生理學(xué)特征與擬定適應(yīng)癥人群的相似性；

（5）臨床擬用給藥途徑、給藥方式的可行性。由于野生型 AAV 的宿主較為廣泛，當(dāng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)存在針對(duì)野生型 AAV 的預(yù)存抗體時(shí)，可能會(huì)影響 AAV 載體產(chǎn)品給藥后的體內(nèi)暴露，進(jìn)而影響對(duì)有效性和安全性的評(píng)價(jià)。因此，在動(dòng)物篩選及分組時(shí)需關(guān)注預(yù)存抗體及其對(duì)體內(nèi)藥物暴露的可能影響，盡量選擇預(yù)存抗體陰性的動(dòng)物用于試驗(yàn)。

采用疾病動(dòng)物模型開展的研究可以同時(shí)提供 AAV 載體產(chǎn)品的藥理活性和毒性信息，也可以模擬臨床患者的病理生理狀態(tài)，因此，必要時(shí)可考慮采用疾病動(dòng)物模型進(jìn)行非臨床安全性研究。

在某些情況下可以考慮使用動(dòng)物源性替代產(chǎn)品，例如，當(dāng)來自目的基因的蛋白質(zhì)由于生物活性的種屬差異而不能在動(dòng)物中發(fā)揮其預(yù)期作用時(shí)，可以使用來自動(dòng)物的同源基因構(gòu)建的替代產(chǎn)品。需要注意的是，使用替代產(chǎn)品開展的非臨床安全性研究在一定程度上可用于識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)，但是并不適合用于定量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

對(duì)于擬用于兒科人群的 AAV 載體產(chǎn)品，ICH S11 適用范圍不包括基因治療產(chǎn)品，同時(shí)指出基因治療產(chǎn)品可參考該指導(dǎo)原則關(guān)于利用現(xiàn)有信息評(píng)估安全性的一些思路，但是，由于 AAV 載體產(chǎn)品的特殊性，應(yīng)充分評(píng)估其在兒科人群中的潛在風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于首次臨床試驗(yàn)擬采用兒科人群（例如適應(yīng)癥僅限于兒科人群），考慮進(jìn)行幼齡動(dòng)物毒理學(xué)試驗(yàn)。若給藥可能對(duì)兒科人群發(fā)育中的器官系統(tǒng)帶來較大的安全性風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行幼齡動(dòng)物毒理學(xué)試驗(yàn)。

3. 給藥方式/途徑

非臨床研究中的給藥方式/途徑應(yīng)能最大程度模擬臨床擬用給藥方式/途徑。如果在動(dòng)物試驗(yàn)中采用其他的給藥方式/途徑，應(yīng)闡明其科學(xué)性和合理性依據(jù)。

4. 組織趨向性和體內(nèi)存續(xù)性

不同血清型 AAV 載體的組織趨向性特征存在差異，然而，這種組織趨向性并不意味著該載體不分布至其他組織器官，因此需通過生物分布研究來考察 AAV 載體產(chǎn)品的靶向和非靶向特征及其風(fēng)險(xiǎn)。另外，AAV 載體的組織趨向性也可能存在種屬差異，而 AAV 載體產(chǎn)品在動(dòng)物與人體之間組織趨向性的差異會(huì)影響動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)有效性和安全性的預(yù)測(cè)價(jià)值，因此，謹(jǐn)慎將非臨床研究中獲得的動(dòng)物數(shù)據(jù)直接外推至人。

AAV 載體產(chǎn)品攜帶的目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物在靶器官/組織中的長期存續(xù)性，是該類產(chǎn)品起效的關(guān)鍵決定因素，而AAV 載體產(chǎn)品及其表達(dá)產(chǎn)物在非靶部位的存續(xù)則可能帶來安全性風(fēng)險(xiǎn)，因此，AAV 載體產(chǎn)品非臨床研究時(shí)需充分考慮目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物的存續(xù)性。

5. 非臨床試驗(yàn)的整合設(shè)計(jì)

基于 AAV 載體產(chǎn)品的特點(diǎn)、相關(guān)動(dòng)物種屬/模型的可獲得性，某些非臨床試驗(yàn)可整合在其他試驗(yàn)中進(jìn)行。例如，如果可行且科學(xué)合理，在疾病動(dòng)物模型的藥效學(xué)試驗(yàn)中伴隨考察毒理學(xué)指標(biāo)，將藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)整合至藥效學(xué)試驗(yàn)和/或毒理學(xué)試驗(yàn)中。整合試驗(yàn)設(shè)計(jì)有助于闡明藥代動(dòng)力學(xué)、藥效、毒性的相關(guān)性。

三、基本內(nèi)容

（一）藥理學(xué)研究

應(yīng)通過藥理學(xué)試驗(yàn)闡述 AAV 載體產(chǎn)品的生物學(xué)作用和作用機(jī)制，提示其在擬定患者人群中使用的生物學(xué)合理性。AAV 載體產(chǎn)品的藥理學(xué)試驗(yàn)通常包括體外和體內(nèi)試驗(yàn)。體外試驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià) AAV 載體產(chǎn)品的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、導(dǎo)入基因的表達(dá)情況、表達(dá)產(chǎn)物的活性等。體內(nèi)試驗(yàn)應(yīng)在與人類疾病相關(guān)的疾病動(dòng)物模型中研究 AAV 載體產(chǎn)品是否可發(fā)揮預(yù)期的藥理學(xué)作用，通過對(duì) AAV 載體產(chǎn)品在預(yù)期靶器官/組織的分布特征、其攜帶的目的基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物在預(yù)期靶器官/組織的表達(dá)情況、疾病相關(guān)指標(biāo)的改善情況等，來評(píng)價(jià)產(chǎn)品的有效性潛力。

（二）藥代動(dòng)力學(xué)研究

1. 生物分布

AAV 載體產(chǎn)品的生物分布研究信息對(duì)提示其有效性和安全性至關(guān)重要。應(yīng)參考 ICH S12 對(duì)基因治療產(chǎn)品非臨床生物分布研究的一般要求，采用相關(guān)動(dòng)物種屬開展生物分布試驗(yàn)，以闡明 AAV 載體產(chǎn)品在體內(nèi)的命運(yùn)和行為。根據(jù)產(chǎn)品特性，檢測(cè)與藥效和毒性相關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)行為，如 AAV 載體的生物分布、存續(xù)和清除特征，攜帶的目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物在體內(nèi)的分布特征等。疾病動(dòng)物模型可能對(duì)評(píng)估 AAV 載體產(chǎn)品的分布特征更有意義，鼓勵(lì)在藥效學(xué)試驗(yàn)中伴隨生物分布研究。

AAV 載體產(chǎn)品生物分布研究應(yīng)采用合適的劑量，以臨床擬用的給藥途徑，在相關(guān)動(dòng)物種屬或動(dòng)物模型中開展。需要檢測(cè)載體水平和目的基因水平。由于 AAV 載體產(chǎn)品最終發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)為目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，因此，在方法可行的情況，需要檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物。采樣時(shí)間點(diǎn)的選擇應(yīng)足以反映 AAV 載體產(chǎn)品隨時(shí)間發(fā)生改變的特征，至少包括在靶組織和非靶組織的峰值和穩(wěn)態(tài)階段，并考慮評(píng)估長期持續(xù)性。應(yīng)在每個(gè)預(yù)設(shè)采樣時(shí)間點(diǎn)評(píng)價(jià)每種性別（如適用）適當(dāng)數(shù)量的動(dòng)物，以產(chǎn)生足夠的數(shù)據(jù)來支持全面的生物分布評(píng)價(jià)。應(yīng)提供動(dòng)物數(shù)量的科學(xué)依據(jù)。一般情況下，建議每個(gè)性別/組/時(shí)間點(diǎn)至少評(píng)估 5 只嚙齒類動(dòng)物或 3 只非嚙齒類動(dòng)物。生物分布研究的檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證。AAV 載體產(chǎn)品生物分布研究的組織應(yīng)至少包括給藥部位、性腺（卵巢/睪丸）、腎上腺、腦、脊髓（頸髓、胸髓、腰髓）、心臟、肝臟、肺臟、腎臟、脾臟、肌肉、血液。另外，需要根據(jù)產(chǎn)品特征增加特定的組織器官，例如：AAV 載體的組織趨向性、目的基因的表達(dá)產(chǎn)物可能發(fā)揮作用的組織；根據(jù)給藥途徑和同類品種信息所提示的潛在毒性靶器官增加其他相關(guān)的組織，包括與給藥途徑相關(guān)的淋巴結(jié)、給藥部位附近的組織[如鞘內(nèi)注射的腦脊液、脊神經(jīng)根（包括前根和后根）、背根神經(jīng)節(jié)等]、外周神經(jīng)、視神經(jīng)、眼部組織（如眼科用藥）等。此外，免疫原性可能對(duì)生物分布產(chǎn)生影響，因此，在生物分布研究時(shí)，建議采集樣本以備必要時(shí)進(jìn)行免疫原性檢測(cè)，以支持對(duì)生物分布數(shù)據(jù)的解釋。

2. 脫落

脫落是指 AAV 載體通過排泄物（尿液、糞便）、分泌物（唾液等）或其他方式排出體外。應(yīng)開展 AAV 載體產(chǎn)品的脫落研究。脫落研究可整合至生物分布研究或其他非臨床研究中。

（三）非臨床安全性研究

在制定非臨床安全性研究策略時(shí)，應(yīng)根據(jù) AAV 載體產(chǎn)品本身的特點(diǎn)以及每個(gè)產(chǎn)品的特點(diǎn)，按照基于風(fēng)險(xiǎn)的原則具體問題具體分析，總體目的是充分提示產(chǎn)品潛在的安全性風(fēng)險(xiǎn)。

1. 安全藥理學(xué)

在首次臨床試驗(yàn)前，應(yīng)采用合適的動(dòng)物種屬開展 AAV 載體產(chǎn)品的安全藥理學(xué)試驗(yàn)，一般包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)安全藥理學(xué)試驗(yàn)。這些試驗(yàn)可整合在一般毒理學(xué)試驗(yàn)中進(jìn)行，若整合進(jìn)行，需滿足安全藥理學(xué)評(píng)價(jià)要求，同時(shí)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)符合 AAV 載體產(chǎn)品的特點(diǎn)。若無法進(jìn)行或不進(jìn)行，應(yīng)提供充分的理由。在必要時(shí)，可能需要開展補(bǔ)充和追加的安全藥理學(xué)試驗(yàn)。對(duì)于腦內(nèi)給藥的 AAV 載體產(chǎn)品，需重點(diǎn)關(guān)注對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)功能的影響，結(jié)合藥物在腦內(nèi)不同區(qū)域的分布及存續(xù)特征，分析對(duì)具體神經(jīng)功能影響的可能性，可單獨(dú)開展試驗(yàn)評(píng)價(jià)，也可結(jié)合在藥效學(xué)試驗(yàn)或毒理學(xué)試驗(yàn)中設(shè)置相應(yīng)的檢測(cè)指標(biāo)。

2. 一般毒理學(xué)

一般毒理學(xué)試驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià) AAV 載體產(chǎn)品的全身毒性和局部毒性、急性毒性和長期毒性或延遲毒性、劑量和效應(yīng)關(guān)系等。應(yīng)基于 AAV 載體產(chǎn)品的生物學(xué)特性、可能的風(fēng)險(xiǎn)因素和安全性擔(dān)憂，采用基于風(fēng)險(xiǎn)、科學(xué)導(dǎo)向的靈活設(shè)計(jì)方案。

2.1 動(dòng)物種屬選擇

關(guān)于毒理學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物種屬的選擇，應(yīng)基于動(dòng)物種屬的藥理學(xué)相關(guān)性、相關(guān)動(dòng)物種屬/模型的可獲得性等因素綜合考慮，總體目標(biāo)是盡可能最大程度地闡明 AAV 載體產(chǎn)品的安全性特征，為人體安全性提供有價(jià)值的預(yù)測(cè)信息。在可行的情況下，應(yīng)獲得兩種相關(guān)動(dòng)物種屬（通常包括嚙齒類動(dòng)物和非嚙齒類動(dòng)物）的非臨床安全性信息。若僅采用一種相關(guān)動(dòng)物，應(yīng)提供科學(xué)合理的依據(jù)。動(dòng)物種屬選擇的考慮因素參考本指導(dǎo)原則“二、總體考慮”項(xiàng)下“2.動(dòng)物種屬/模型選擇”的建議。通常采用雌雄兩種性別動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。若采用單性別進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)提供合理性依據(jù)。

2.2 分組和劑量設(shè)計(jì)

通常情況下，一般毒理學(xué)試驗(yàn)中的給藥劑量應(yīng)包括多個(gè)劑量。合適的劑量間距，有助于評(píng)估毒性反應(yīng)-劑量關(guān)系的陡峭程度和Ⅰ期臨床劑量遞增方案的設(shè)計(jì)。低劑量一般對(duì)應(yīng)于預(yù)期的有效劑量。高劑量一般為了產(chǎn)生毒性反應(yīng)或提供足夠的安全窗，高劑量的設(shè)置可能會(huì)受到動(dòng)物模型、給藥部位容量/大小、給藥途徑和制劑最高濃度等限制，可選擇最大可行劑量作為高劑量。需結(jié)合處方組成和生產(chǎn)工藝，設(shè)置合適的對(duì)照組（例如溶媒、輔料、空載體、含有非功能基因的載體等對(duì)照組），以幫助確定試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的不良結(jié)果是否與受試物相關(guān)。當(dāng)使用疾病動(dòng)物模型作為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)考慮設(shè)計(jì)模型對(duì)照組。

2.3 給藥方案和觀察期限

試驗(yàn)中的給藥方案應(yīng)最大程度地模擬臨床擬用給藥方案，給藥途徑應(yīng)能反映臨床使用情況。毒理學(xué)試驗(yàn)的給藥次數(shù)一般基于擬定的臨床給藥次數(shù)而設(shè)計(jì)。AAV 載體產(chǎn)品臨床上通常為單次給藥，在體內(nèi)長期存續(xù)發(fā)揮作用，因此，一般毒理學(xué)試驗(yàn)通常采用單次給藥，根據(jù)產(chǎn)品的作用特點(diǎn)（如載體在體內(nèi)存續(xù)時(shí)間、目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物表達(dá)的相關(guān)信息等），確定總觀察期限。需闡述觀察期限設(shè)計(jì)的合理性。通常一般毒理學(xué)試驗(yàn)的總觀察期限不短于 6 個(gè)月，更長的觀察期限更有利于觀察長期毒性或延遲毒性（注釋 1）。

一般毒理學(xué)試驗(yàn)應(yīng)包括多個(gè)解剖時(shí)間點(diǎn)（注釋 2），以評(píng)估可能的急性毒性及其恢復(fù)情況、長期存續(xù)導(dǎo)致的長期毒性或延遲毒性，并評(píng)價(jià)產(chǎn)品發(fā)揮作用的持續(xù)性，以及劑量/暴露量與毒性反應(yīng)、生物分布與毒性反應(yīng)的關(guān)系。

2.4 檢測(cè)指標(biāo)

除一般毒理學(xué)試驗(yàn)的常規(guī)觀察指標(biāo)外，需結(jié)合 AAV 載體產(chǎn)品特性，增加合適的觀察指標(biāo)，如免疫原性、免疫毒性、腦內(nèi)給藥的神經(jīng)毒性、眼內(nèi)給藥的眼毒性，以及基于同類品種發(fā)現(xiàn)的值得關(guān)注的安全性信號(hào)，在一般毒理學(xué)試驗(yàn)中設(shè)置特異性的毒性檢測(cè)指標(biāo)，并采用敏感的檢測(cè)方法。應(yīng)設(shè)置合適的時(shí)間點(diǎn)以能敏感地檢測(cè)到對(duì)相關(guān)指標(biāo)的影響。在一般毒理學(xué)試驗(yàn)中需伴隨進(jìn)行毒代研究，考察 AAV 載體產(chǎn)品中載體和目的基因在體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄/翻譯、分布、存續(xù)情況，為毒性試驗(yàn)的結(jié)果解釋提供支持性數(shù)據(jù)（必要時(shí)設(shè)置衛(wèi)星組），還可伴隨開展脫落研究。

3. 免疫原性

影響藥物免疫原性的因素復(fù)雜，對(duì)于 AAV 載體產(chǎn)品，機(jī)體可能存在對(duì)于野生型 AAV 的免疫記憶、AAV 載體誘導(dǎo)的先天性免疫和適應(yīng)性免疫、表達(dá)產(chǎn)物誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)，因此，AAV 載體產(chǎn)品更容易引起免疫原性，應(yīng)采用合適的方法開展免疫原性研究，包括對(duì) AAV 載體和表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的預(yù)存抗體可能會(huì)影響 AAV 載體產(chǎn)品的體內(nèi)暴露，進(jìn)而對(duì)有效性和安全性評(píng)價(jià)產(chǎn)生影響。如果試驗(yàn)中納入少量預(yù)存抗體滴度低的動(dòng)物時(shí)，應(yīng)評(píng)估預(yù)存抗體對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。

4. 遺傳毒性

通常標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗(yàn)不適用于 AAV 載體產(chǎn)品的遺傳毒性評(píng)價(jià)。通常認(rèn)為野生型 AAV 主動(dòng)整合至宿主基因組中的概率低，但是與野生型 AAV 相比，AAV 載體產(chǎn)品的基因組整合特性可能會(huì)發(fā)生改變。若 AAV 載體產(chǎn)品整合至宿主基因組中，可能會(huì)導(dǎo)致宿主遺傳物質(zhì)改變和后續(xù)不良生物學(xué)效應(yīng)。因此，應(yīng)進(jìn)行基因組整合分析，當(dāng)存在整合至宿主基因組中的可能性時(shí)，需分析基因組整合位點(diǎn)及可能帶來的安全性風(fēng)險(xiǎn)。

5. 致癌性

標(biāo)準(zhǔn)的嚙齒類動(dòng)物致癌性試驗(yàn)一般不適用于評(píng)價(jià) AAV載體產(chǎn)品。可采用證據(jù)權(quán)重（Weight of Evidence，WoE）方法來評(píng)估致癌性風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)進(jìn)行致癌性相關(guān)研究。WoE 評(píng)估因素一般包括但不限于：

（1）導(dǎo)入的目的基因和藥理作用通路與腫瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性；

（2）潛在的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)、基因組整合分析數(shù)據(jù)；

（3）一般毒理學(xué)試驗(yàn)中癌前病變或腫瘤發(fā)生相關(guān)的組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)；

（4）生產(chǎn)體系中可能存在的潛在致癌成分；

（5）其他可能與人體內(nèi)腫瘤發(fā)生相關(guān)的因素。

6. 生殖毒性

AAV 載體產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性、作用機(jī)制、臨床適應(yīng)癥和擬用人群、一般毒理學(xué)試驗(yàn)中的發(fā)現(xiàn)、生物分布和脫落特征等信息評(píng)估潛在的生殖和發(fā)育毒性風(fēng)險(xiǎn)。生殖毒性試驗(yàn)的研究策略和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估可參考相關(guān)指導(dǎo)原則。AAV 載體產(chǎn)品需關(guān)注生殖系傳遞風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng) AAV 載體產(chǎn)品在性腺持續(xù)存在時(shí)，需要進(jìn)一步研究其在生殖細(xì)胞（例如卵母細(xì)胞、精子）的暴露水平，如有暴露，開展生殖系傳遞試驗(yàn)。

7. 制劑安全性

應(yīng)根據(jù) AAV 載體產(chǎn)品的特點(diǎn)和臨床應(yīng)用情況考慮開展終產(chǎn)品制劑的刺激性、溶血性試驗(yàn)。

8. 其他

應(yīng)基于產(chǎn)品特性及風(fēng)險(xiǎn)，考慮開展必要的其他試驗(yàn)。

四、注釋

注釋 1：AAV 載體產(chǎn)品一般毒理學(xué)試驗(yàn)的觀察期限如何設(shè)置，尚需不斷積累經(jīng)驗(yàn)。基于產(chǎn)品設(shè)計(jì)原理，此類產(chǎn)品通常在體內(nèi)長期存續(xù)發(fā)揮作用，一般毒理學(xué)試驗(yàn)需要考察長期毒性或延遲毒性，因此，建議根據(jù)產(chǎn)品的作用特點(diǎn)（如載體在體內(nèi)存續(xù)時(shí)間、目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物表達(dá)的相關(guān)信息等），確定總觀察期限。基于當(dāng)前認(rèn)知，建議一般毒理學(xué)試驗(yàn)的總觀察期限不短于 6 個(gè)月，但是在可行的情況下或者是為了考察特殊的毒性特征，更長的觀察期限更有利于觀察長期毒性或延遲毒性。

另外，基于同類產(chǎn)品的毒理學(xué)信息或受試物前期已有的毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果提示具有特殊的毒性風(fēng)險(xiǎn)，而需要考察受試物的該毒性風(fēng)險(xiǎn)是否進(jìn)展或是否能逐漸恢復(fù)時(shí)，需考慮進(jìn)行更長期限的觀察。

注釋 2：關(guān)于 AAV 載體產(chǎn)品一般毒理學(xué)試驗(yàn)的解剖時(shí)間點(diǎn)的設(shè)計(jì)，考慮到該類產(chǎn)品通常在體內(nèi)長期存續(xù)發(fā)揮作用，需要通過多個(gè)解剖時(shí)間點(diǎn)來考察藥物引起的毒性反應(yīng)特征（例如急性毒性、長期毒性或延遲毒性、毒性可逆性等），但是，在一項(xiàng)試驗(yàn)中不一定需要或能夠包括所有解剖時(shí)間點(diǎn)，可以在不同觀察期限試驗(yàn)中涵蓋這些時(shí)間點(diǎn)。對(duì)其具體時(shí)間點(diǎn)的設(shè)置，尚需不斷積累經(jīng)驗(yàn)。通常應(yīng)根據(jù) AAV 載體及其表達(dá)產(chǎn)物的生物分布特征，選取解剖時(shí)間點(diǎn)，例如包括導(dǎo)入目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物峰值時(shí)間點(diǎn)、穩(wěn)態(tài)時(shí)間點(diǎn)，更長觀察期限的一般毒理學(xué)試驗(yàn)中還應(yīng)包括評(píng)估長期持續(xù)性及長期毒性或延遲毒性的時(shí)間點(diǎn)。

此外，某些情況下，藥物在組織或器官的暴露量高低與導(dǎo)致該組織或器官出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)可能不一致，因此需基于所要考察的預(yù)期毒性反應(yīng)的特點(diǎn)設(shè)置合適的解剖時(shí)間點(diǎn)。

來源：CDE

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