國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心
2024 年 01 月
目 錄
六、質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 9
體內(nèi)基因治療產(chǎn)品一般選用適當(dāng)?shù)妮d體或轉(zhuǎn)染方式將外源基因（或基因編輯工具）導(dǎo)入人體，通過替代、補(bǔ)償、阻斷、修正特定基因以達(dá)到治療疾病的目的。重組腺相關(guān)病毒
（recombinant adeno-associated virus，rAAV）載體因其理化性質(zhì)穩(wěn)定、致病性弱、整合風(fēng)險(xiǎn)低、外源基因表達(dá)持久等結(jié)構(gòu)和生物學(xué)方面的優(yōu)勢，已成為體內(nèi)基因治療領(lǐng)域研究、應(yīng)用最為廣泛的載體之一。
為規(guī)范和指導(dǎo)以 rAAV 為載體的體內(nèi)基因治療產(chǎn)品（以下簡稱為“rAAV 載體類產(chǎn)品”）按照藥品研發(fā)規(guī)律和相關(guān)技 術(shù)管理規(guī)范進(jìn)行研究，提交符合臨床試驗(yàn)申報(bào)要求的藥學(xué)研 究資料，根據(jù)《中華人民共和國藥品管理法》、《藥品注冊管 理辦法》等相關(guān)法律法規(guī)制定本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則僅基 于此類產(chǎn)品現(xiàn)階段的研發(fā)水平和科學(xué)認(rèn)知，從技術(shù)審評的角 度對此類產(chǎn)品在申報(bào)臨床試驗(yàn)時(shí)應(yīng)完成的藥學(xué)研究提出一 般性建議。因不同產(chǎn)品在設(shè)計(jì)和臨床應(yīng)用方面可能存在差異， 具體品種的藥學(xué)研究可采用具體問題具體分析的原則，但應(yīng) 能滿足藥學(xué)技術(shù)評價(jià)的需求，并符合臨床試驗(yàn)用藥品質(zhì)量的 要求。后續(xù)，相關(guān)技術(shù)要求將隨著行業(yè)水平的提高、技術(shù)的 進(jìn)步，以及產(chǎn)品認(rèn)知的積累逐步完善。
本指導(dǎo)原則中的 rAAV 載體是指基于腺相關(guān)病毒的結(jié)構(gòu)
和理化特性，經(jīng)設(shè)計(jì)和重組改造所形成的用于攜帶外源目的基因（或核酸片段）的病毒載體。本指導(dǎo)原則主要針對應(yīng)用于體內(nèi)基因治療的 rAAV 載體類產(chǎn)品在申報(bào)臨床試驗(yàn)時(shí)應(yīng)完成和提交的藥學(xué)研究信息提出建議。
需要說明的是，對于攜帶基因編輯工具的 rAAV 載體類產(chǎn)品，由于其作用機(jī)制涉及對人體細(xì)胞基因組的編輯操作， 而當(dāng)前此類產(chǎn)品的人體研究經(jīng)驗(yàn)較為有限，因此仍屬于風(fēng)險(xiǎn)相對較高的產(chǎn)品，可能需要開展更全面的風(fēng)險(xiǎn)評估和質(zhì)量控制。隨著研究的深入和經(jīng)驗(yàn)的積累，相關(guān)研究在參考本指導(dǎo)原則的同時(shí)，可能需要適當(dāng)補(bǔ)充和完善相關(guān)的技術(shù)要求。
臨床試驗(yàn)申報(bào)階段，rAAV 載體類產(chǎn)品可參考《中國藥典》的相關(guān)要求（尤其是“人用基因治療制品總論”的要求），結(jié)合申報(bào)階段的特點(diǎn)，制定合理的藥學(xué)研究計(jì)劃和質(zhì)量控制策略。臨床試驗(yàn)用藥品應(yīng)按照“《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010 年修訂）》臨床試驗(yàn)用藥品附錄”（2022 年 第 43 號）的相關(guān)要求進(jìn)行生產(chǎn)。臨床試驗(yàn)用藥品的研發(fā)、生產(chǎn)、使用和廢棄處理應(yīng)符合生物安全相關(guān)法律法規(guī)的要求。
按照藥品研發(fā)的 rAAV 載體類產(chǎn)品應(yīng)遵循藥品研發(fā)的一般規(guī)律，在臨床試驗(yàn)申報(bào)時(shí)提供必要的藥學(xué)研究信息，說明和/或證明產(chǎn)品設(shè)計(jì)的合理性，生產(chǎn)工藝的可重復(fù)性，臨床試驗(yàn)用藥品質(zhì)量的可控性，分析藥品風(fēng)險(xiǎn)控制策略的合理性和
充分性，最大程度降低藥品的安全性風(fēng)險(xiǎn)，以支持臨床試驗(yàn)的開展。
rAAV 載體類臨床試驗(yàn)用藥品可參考《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中的一般原則進(jìn)行風(fēng) 險(xiǎn)分析和控制。在臨床試驗(yàn)申報(bào)階段一般應(yīng)完成臨床試驗(yàn)用 藥品生產(chǎn)相關(guān)的種子批、細(xì)胞庫的制備和檢定，并開展必要 的穩(wěn)定性研究，以支持臨床試驗(yàn)用藥品生產(chǎn)所需的傳代代次。基于產(chǎn)品特點(diǎn)，完成臨床試驗(yàn)用藥品生產(chǎn)工藝的開發(fā)和初步 確認(rèn)，并建立必要的生產(chǎn)過程中控制項(xiàng)目。選擇代表性樣品 開展質(zhì)量研究，并基于對產(chǎn)品質(zhì)量屬性的理解和前期的數(shù)據(jù) 積累建立臨床試驗(yàn)用藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量控制相關(guān)分析方 法經(jīng)研究確認(rèn)，應(yīng)能滿足分析和質(zhì)量控制的需求。基于產(chǎn)品 設(shè)計(jì)和作用機(jī)制，初步建立生物學(xué)活性分析方法。臨床試驗(yàn) 用藥品的穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)能支持開展臨床試驗(yàn)。
由于不同產(chǎn)品之間的風(fēng)險(xiǎn)可能不同，不同研發(fā)階段的產(chǎn)品可能存在設(shè)計(jì)和工藝方面的差異，為支持人體臨床試驗(yàn)的安全性，申報(bào)臨床試驗(yàn)時(shí)需提供支持申報(bào)的非臨床研究樣品與擬用于臨床試驗(yàn)的藥品在生產(chǎn)用物料、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量等方面的對比信息。臨床試驗(yàn)用藥品的質(zhì)量不得劣于非臨床研究用樣品的質(zhì)量，尤其需要關(guān)注與安全性相關(guān)的質(zhì)量屬性。
生產(chǎn)用物料是指產(chǎn)品生產(chǎn)過程中所使用的生物或化學(xué)材
料，包括起始原材料（如生產(chǎn)/包裝用細(xì)胞、包裝用質(zhì)粒、包裝用病毒等）、生產(chǎn)過程使用或添加的物料（如培養(yǎng)基及其添加成分、核酸酶、純化填料、緩沖鹽、轉(zhuǎn)染試劑等）、輔料， 以及生產(chǎn)用耗材（如細(xì)胞培養(yǎng)袋、濾膜、深層濾器、儲液袋、傳輸管路、暫存容器等）等。
1. 起始原材料
不同病毒包裝系統(tǒng)包裝生產(chǎn)的 rAAV 載體在基因組穩(wěn)定 性、包裝效率、外源因子的引入風(fēng)險(xiǎn)等方面可能存在一定差 異，建議結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)和風(fēng)險(xiǎn)選擇合適的包裝系統(tǒng)用于生產(chǎn)。rAAV 載體生產(chǎn)常見的病毒包裝系統(tǒng)包括質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（瞬轉(zhuǎn)）包裝系統(tǒng)、輔助病毒包裝系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞/桿狀病毒包裝 系統(tǒng)等，涉及的起始原材料可能包括包裝用質(zhì)粒、生產(chǎn)/包裝 用細(xì)胞、包裝用病毒等。產(chǎn)品在設(shè)計(jì)和上游構(gòu)建方面，可參 考《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中“五、產(chǎn)品設(shè)計(jì)的一般考慮”和“六、生產(chǎn)用物料”章節(jié) 的相關(guān)要求。用于臨床試驗(yàn)用藥品生產(chǎn)的起始原材料來源應(yīng) 清晰，具有完整的溯源性信息。申報(bào)時(shí)，根據(jù)包裝系統(tǒng)提供 相應(yīng)的上游構(gòu)建信息，以及相關(guān)的證明性文件和研究報(bào)告， 信息應(yīng)準(zhǔn)確、完整。基于包裝系統(tǒng)的類型，藥品生產(chǎn)如涉及 包裝用質(zhì)粒、包裝用病毒等起始原材料的制備，也應(yīng)提供相 應(yīng)的藥學(xué)研究信息，具體可參考同類型生物制品原液的申報(bào) 資料要求。
（1） 目的基因：詳細(xì)說明目的基因的序列和來源信息， 與野生型序列的差異，提供序列設(shè)計(jì)（如基因篩選、改造和優(yōu)化等）合理性和科學(xué)性的依據(jù)。
（2） 質(zhì)粒 DNA：提供質(zhì)粒構(gòu)建的具體信息，包括原始質(zhì)粒的來源、質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖、重要基因或元件的序列來源及功能信息，詳述質(zhì)粒構(gòu)建過程并對最終質(zhì)粒序列進(jìn)行確認(rèn)。提供相關(guān)的來源證明和檢定報(bào)告。瞬轉(zhuǎn)生產(chǎn) rAAV 的包裝用質(zhì)粒的生產(chǎn)應(yīng)基于細(xì)菌種子批系統(tǒng)，采用適宜的方法純化，并基于風(fēng)險(xiǎn)分析和產(chǎn)品特性對每批質(zhì)粒進(jìn)行質(zhì)量檢測，檢測結(jié)果符合要求后方能用于載體生產(chǎn)。
（3） 細(xì)菌種子批：瞬轉(zhuǎn)生產(chǎn)用質(zhì)粒的生產(chǎn)用菌種需進(jìn) 行建庫管理，申報(bào)時(shí)需提供宿主菌的來源、基因型等信息和證明文件，詳述細(xì)菌種子和種子批的建立過程。按照《中國藥典》要求進(jìn)行種子批的檢定，并提供相應(yīng)的檢定報(bào)告。
（4） 病毒種子批：用于 rAAV 載體類產(chǎn)品生產(chǎn)的包裝用病毒應(yīng)進(jìn)行建庫管理。申報(bào)時(shí)需提供原始毒種的來源、歷史培養(yǎng)信息及相關(guān)證明文件，如有改造，需詳述病毒種子改造和構(gòu)建的具體過程，結(jié)合溯源信息評估病毒種子的安全性風(fēng)險(xiǎn)。病毒種子批的建立和檢定應(yīng)滿足《中國藥典》要求， 并提供相應(yīng)的檢定報(bào)告。
（5） 生產(chǎn)/包裝細(xì)胞庫：提供 rAAV 載體類產(chǎn)品的生產(chǎn)/ 包裝細(xì)胞的來源和證明文件，細(xì)胞的歷史溯源信息應(yīng)完整，
若存在基因改造，應(yīng)具體說明改造依據(jù)、改造方法和改造結(jié)果的確認(rèn)研究等。細(xì)胞的溯源信息和質(zhì)量控制策略應(yīng)滿足風(fēng)險(xiǎn)控制要求。生產(chǎn)/包裝細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行建庫管理，建庫過程和細(xì)胞庫檢定應(yīng)符合《中國藥典》要求，并提供相應(yīng)的檢定報(bào)告， 尤其應(yīng)關(guān)注種屬特異性病毒和歷史培養(yǎng)、建庫過程中可能引入的病原體的檢定。
細(xì)菌/病毒種子批和生產(chǎn)/包裝細(xì)胞庫的傳代穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)能支持臨床試驗(yàn)用藥品的生產(chǎn)。包裝用質(zhì)粒、包裝用病毒的制備和質(zhì)量控制可參考《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中的相關(guān)要求，保存穩(wěn)定性應(yīng)能滿足生產(chǎn)需求。
2. 其他生產(chǎn)用物料
除起始原材料外，需提供所有其他生產(chǎn)使用的原材料和輔料的來源、生物源性組分、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、使用階段等信息， 并提供相關(guān)的證明文件。原材料和輔料的質(zhì)量控制可參照
《中國藥典》通則“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制” 的相關(guān)要求，質(zhì)控策略應(yīng)與其風(fēng)險(xiǎn)相符。如有可能，應(yīng)盡量避免使用動物源或人源性原材料。如需使用，需提供相關(guān)的必要性和合理性說明，并制定相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制措施。不得使用β內(nèi)酰胺類抗生素、鏈霉素，以及其他如溴乙錠等有毒有害試劑，盡量減少或避免使用對環(huán)境或人體具有潛在不利影響的試劑，如 Triton X-100 等。
臨床試驗(yàn)申報(bào)時(shí)，需提供關(guān)鍵的生產(chǎn)用耗材、儀器和設(shè) 備的信息。樣品直接接觸的生產(chǎn)用耗材和設(shè)備經(jīng)評估或研究， 應(yīng)無明顯相容性風(fēng)險(xiǎn)，關(guān)注樣品接觸材質(zhì)對病毒顆粒的吸附 和活性的影響。
通過前期的工藝開發(fā)和臨床試驗(yàn)用藥品的制備，應(yīng)能建立并初步證明生產(chǎn)工藝的合理性和可重復(fù)性，擬定工藝應(yīng)能穩(wěn)定生產(chǎn)出符合預(yù)期質(zhì)量的臨床試驗(yàn)用藥品。
申報(bào)資料須明確臨床試驗(yàn)用藥品的生產(chǎn)廠和檢驗(yàn)廠，提供基本的生產(chǎn)工藝信息，包括生產(chǎn)規(guī)模、工藝流程、具體的工藝參數(shù)、過程中控制信息、批次定義等。工藝開發(fā)信息應(yīng)能支持臨床試驗(yàn)用藥品生產(chǎn)工藝設(shè)定的合理性，如質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)工藝中質(zhì)粒的用量和配比、桿狀病毒感染工藝中的病毒用量和比例、病毒收獲條件、純化工藝條件、制劑處方篩選等。綜合工藝開發(fā)研究信息、非臨床研究用批次和臨床試驗(yàn)用批次的生產(chǎn)情況，初步評估臨床試驗(yàn)用藥品的生產(chǎn)工藝的合理性和可重復(fù)性。由于 rAAV 載體類產(chǎn)品的細(xì)胞包裝產(chǎn)物中， 產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)種類較多，如空殼病毒等，一般需要通過多個(gè)工藝單元進(jìn)行分離純化。部分分離純化方法，如密度梯度離心等，在工藝放大方面可能具有一定局限性，因此，工藝單元的設(shè)定還需考慮后續(xù)生產(chǎn)規(guī)模放大的可能性和可行性。
臨床試驗(yàn)用藥品的生產(chǎn)工藝應(yīng)設(shè)立必要的過程中控制項(xiàng)
目。建議在適宜的工藝步驟設(shè)立微生物安全性相關(guān)的控制項(xiàng)目和與產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性相關(guān)的中控項(xiàng)目。一般建議在病毒收獲液階段常規(guī)開展微生物安全性相關(guān)的中控檢測，項(xiàng)目設(shè)定應(yīng)與產(chǎn)品工藝相匹配，常見如無菌/生物負(fù)荷、內(nèi)毒素、支原體、螺原體（如涉及昆蟲細(xì)胞或植物源成分）和內(nèi)/外源病毒因子等檢定。外源因子的檢測可參考《中國藥典》和 ICH Q5A 的要求。
基于產(chǎn)品內(nèi)/外源病毒因子的風(fēng)險(xiǎn)評估，必要時(shí)，應(yīng)考慮 在工藝步驟中設(shè)立病毒清除/滅活工藝單元。一般認(rèn)為，生產(chǎn) 過程中如使用了包裝用病毒或存在其他內(nèi)/外源病毒污染風(fēng) 險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)考慮在工藝中設(shè)立病毒清除/滅活單元以清除/滅活 非目標(biāo)病毒，如去污劑或低 pH 孵育對包膜病毒的滅活，熱滅活工藝對溫度敏感病毒的滅活，層析和納濾步驟對病毒的 清除等。針對設(shè)立的病毒清除/滅活工藝單元，建議參考 ICH Q5A 的一般原則開展病毒清除/滅活驗(yàn)證研究。如有可能，驗(yàn)證研究應(yīng)盡可能將原材料或工藝步驟中可能引入的病毒或 同類病毒納入指示病毒，如昆蟲細(xì)胞/桿狀病毒包裝系統(tǒng)中的 桿狀病毒和潛在的彈狀病毒等。有效的病毒清除/滅活工藝單 元病毒滴度下降因子應(yīng)能達(dá)到≥4log10 的病毒清除/滅活效果。基于風(fēng)險(xiǎn)評估，必要時(shí)，建議考慮設(shè)立多種不同原理的病毒 清除/滅活工藝單元。基于病毒收獲液中非目標(biāo)病毒的載量檢 測數(shù)據(jù)，根據(jù)驗(yàn)證研究結(jié)果，評估非目標(biāo)病毒殘留的安全性風(fēng)險(xiǎn)。
1. 質(zhì)量研究
rAAV 載體類產(chǎn)品的質(zhì)量研究應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的設(shè)計(jì)、作用機(jī)制和生產(chǎn)工藝等方面確定，一般包括（但不限于）：鑒別、結(jié)構(gòu)分析、一般理化特性、含量、純度、生物學(xué)活性、雜質(zhì)、污染物檢測等。研究樣品應(yīng)具有代表性，如工藝相近或相同的非臨床研究用樣品、臨床試驗(yàn)用藥品等。質(zhì)量研究信息應(yīng)完整，包括分析方法原理介紹、研究樣品、試驗(yàn)條件和基本步驟、數(shù)據(jù)處理和結(jié)果分析等，分析方法應(yīng)能滿足預(yù)期用途。
產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)和理化特性研究一般包括全基因組的序列分析，單鏈/自身互補(bǔ)型雙鏈組成情況（如適用），衣殼蛋白亞基的分子量、氨基酸序列和翻譯后修飾研究，病毒顆粒的衣殼蛋白亞基比例、熱穩(wěn)定性（溫度變化條件下的病毒顆粒結(jié)構(gòu)表征）、顆粒形態(tài)和粒徑分析等。由于生產(chǎn)過程中 rAAV 載體類產(chǎn)品可能出現(xiàn)基因組不完整或序列突變的情況，建議對病毒基因組完整性進(jìn)行研究。rAAV 載體類產(chǎn)品的含量、純度和活性分析一般包括載體含量（如病毒顆粒數(shù)、基因組滴度、感染滴度等）、衣殼蛋白亞基的純度、病毒顆粒純度、比滴度、生物學(xué)活性等。由于 rAAV 載體類產(chǎn)品具有較高的異質(zhì)性，純度研究需盡量對各類產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行分析，如空殼病毒、部分包裝病毒、游離衣殼蛋白、游離核酸、DNA
錯(cuò)誤包裝、病毒聚集體、可復(fù)制型 AAV 等。基于產(chǎn)品作用機(jī)制的設(shè)計(jì)，建議初步建立相關(guān)的生物學(xué)活性分析方法，如對 外源目的基因表達(dá)產(chǎn)物正確性的確認(rèn)，目的基因的表達(dá)水平、表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)活性等研究。由于作用機(jī)制的差異，除基 因編輯類產(chǎn)品外，對于開發(fā)難度較大的表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)活 性分析方法，可考慮在臨床試驗(yàn)期間逐步建立并完善，但建 議在其他研究水平進(jìn)行質(zhì)量控制（如表達(dá)量等），必要時(shí)可與 監(jiān)管機(jī)構(gòu)進(jìn)行溝通。
結(jié)合工藝，對引入的各類工藝相關(guān)雜質(zhì)的殘留水平進(jìn)行分析或檢測，并評估其安全性風(fēng)險(xiǎn)。例如，S/D 滅活試劑， 親和配基，宿主細(xì)胞蛋白，宿主細(xì)胞 DNA，生產(chǎn)用質(zhì)粒（如有），核酸酶，E1A/E1B 基因（如有），有安全性風(fēng)險(xiǎn)的轉(zhuǎn)染試劑，裂解試劑，氯化銫或碘克沙醇等沉降劑（如有），非目標(biāo)病毒殘留（如包裝用病毒及其相關(guān)雜質(zhì)等），殘留 DNA 片段大小分布等。對生產(chǎn)中可能引入的污染物如細(xì)菌、真菌、支原體、內(nèi)/外源病毒、細(xì)菌內(nèi)毒素等進(jìn)行檢測，或結(jié)合過程控制進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。
其他一般特性分析可能還包括外觀、裝量、pH 值、滲透壓、可見異物、關(guān)鍵輔料含量、不溶性微粒等。
2. 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
臨床試驗(yàn)用藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量研究，以及前期對產(chǎn)品認(rèn)知的積累等綜合評估后擬定。
rAAV 載體類產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)常見包括一般檢查（如外觀、可見異物、不溶性微粒、滲透壓、pH 值、裝量等）、鑒別（如基因組相關(guān)的鑒別、衣殼蛋白亞基相關(guān)的鑒別等）、含量（如 病毒顆粒數(shù)、基因組滴度、感染滴度等）、比滴度、生物學(xué)活 性、純度、產(chǎn)品和工藝相關(guān)雜質(zhì)、可復(fù)制型 AAV、污染物、關(guān)鍵輔料含量等。考慮到病毒包裝用細(xì)胞的差異，建議持續(xù) 收集包裝用細(xì)胞的 DNA 殘留水平和片段大小分布數(shù)據(jù)，結(jié)合病毒包裝用細(xì)胞的風(fēng)險(xiǎn)評估，針對 DNA 殘留水平、片段大小、特定轉(zhuǎn)化因子（如 E1A/E1B 等），及其他特定風(fēng)險(xiǎn)序 列等建立合理的質(zhì)控策略。由于 rAAV 載體類產(chǎn)品的包裝產(chǎn)物類型較多，擬定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)能有效控制各類組分的含量， 如病毒顆粒總量，有活性的病毒載體含量，空殼病毒顆粒的 殘留等。一般建議參考非臨床毒理研究批次樣品的質(zhì)量初步 擬定臨床試驗(yàn)用藥品的標(biāo)準(zhǔn)限度，特別應(yīng)關(guān)注與安全性相關(guān) 的項(xiàng)目，保障臨床試驗(yàn)用藥品的安全性。
3. 分析方法
申報(bào)臨床試驗(yàn)時(shí)，需提供質(zhì)量控制相關(guān)的分析方法信息， 包括方法學(xué)原理、分析儀器、試劑耗材、主要操作步驟、數(shù) 據(jù)處理、結(jié)果分析和結(jié)果判斷等。對質(zhì)量控制相關(guān)的分析方 法進(jìn)行確認(rèn)研究。由于部分產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，如空殼病毒、部 分包裝病毒等理化特性與目標(biāo)產(chǎn)物較為接近，分離和定量分 析相對困難，建議選擇分離度好、性能穩(wěn)定的分析方法用于
質(zhì)量控制。可復(fù)制型 AAV 作為 rAAV 載體類產(chǎn)品中與安全性相關(guān)的重要控制項(xiàng)目，應(yīng)建立敏感、適用的分析方法。分析方法中靶細(xì)胞的傳代方式、培養(yǎng)條件，以及輔助病毒的類型和用量應(yīng)有利于可復(fù)制型 AAV 的復(fù)制和檢出，檢測靶點(diǎn)的選擇需充分考慮可復(fù)制型 AAV 產(chǎn)生的方式和類型。鑒于不同衣殼類型的 AAV 對細(xì)胞的感染特性可能存在差異，方法建立需關(guān)注檢定用細(xì)胞、輔助病毒、對照設(shè)立的適用性。一般認(rèn)為，相同血清型或衣殼類型的陽性對照病毒可能在感染特性方面更具有代表性。
根據(jù)檢測需要，建立質(zhì)控分析用標(biāo)準(zhǔn)品/對照品。標(biāo)準(zhǔn)品
/對照品的建立、制備和保管可參照《中國藥典》“生物制品國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備和標(biāo)定規(guī)程”的相關(guān)要求。基于標(biāo)準(zhǔn)品/對照品的特性和使用目的，進(jìn)行特性分析（如結(jié)構(gòu)、活性、純度、含量和其他特性等）、標(biāo)定和穩(wěn)定性研究，并確保標(biāo)準(zhǔn)品/對照品的可溯源性。
參考《生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》、《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》等指南開展 rAAV 載體類產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究，可能涉及的研究樣品包括生產(chǎn)中間品、原液和制劑等，研究條件和包裝容器應(yīng)具有代表性，考察指標(biāo)應(yīng)能敏感反應(yīng)樣品的穩(wěn)定性，常見的考察指標(biāo)包括如一般理化特性、外觀、不溶性微粒、含量（如
病毒顆粒數(shù)、基因組滴度、感染滴度等）、比滴度、純度、生物學(xué)活性、污染物、關(guān)鍵輔料含量等。研究項(xiàng)目一般包括長期穩(wěn)定性、加速穩(wěn)定性、影響因素研究等，建議重點(diǎn)關(guān)注凍融、高溫等病毒敏感條件對樣品的影響。對于產(chǎn)量較少的產(chǎn)品（尤其是罕見病用藥），基于質(zhì)量屬性在穩(wěn)定性方面的變化特征，對于穩(wěn)定性研究過程中一定期限內(nèi)可能無顯著變化趨勢的質(zhì)量屬性檢項(xiàng)，經(jīng)充分評估后，可考慮在該期限內(nèi)適當(dāng)減少檢測取樣點(diǎn)，或檢測其他具有相關(guān)性的質(zhì)量屬性，如除初期和末期需進(jìn)行無菌檢查外，部分檢測點(diǎn)可采用容器的密閉完整性檢測作為無菌的支持性檢測等。
根據(jù)臨床試驗(yàn)用藥品生產(chǎn)和使用可能涉及的運(yùn)輸，結(jié)合穩(wěn)定性研究，開展運(yùn)輸風(fēng)險(xiǎn)評估，必要時(shí)應(yīng)開展運(yùn)輸穩(wěn)定性研究。參考臨床試驗(yàn)方案，開展臨床使用穩(wěn)定性研究。不同適應(yīng)癥設(shè)計(jì)的 rAAV 載體類產(chǎn)品的臨床給藥方式可能較為多樣，部分給藥器械可能會對 rAAV 載體類產(chǎn)品產(chǎn)生明顯的吸附作用或活性影響，導(dǎo)致產(chǎn)品滴度下降。建議關(guān)注 rAAV 載體類產(chǎn)品與擬定使用的給藥器械之間的相容性，并通過模擬臨床給藥流程，考察給藥劑量的準(zhǔn)確性和產(chǎn)品的安全性，評估產(chǎn)品的滴度、純度、生物學(xué)活性、不溶性微粒、微生物相關(guān)安全性等是否會受給藥器械和給藥流程的影響。
產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究應(yīng)能支持臨床試驗(yàn)的開展。
提供與樣品接觸的包裝材料的選擇依據(jù)和相關(guān)信息，包括供應(yīng)商、包材組成、包裝材質(zhì)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、供應(yīng)商提供的 相容性研究等。開展相關(guān)的研究或評估，初步分析說明包材 的適用性、密封性和相容性符合臨床試驗(yàn)用藥品的使用要求。部分產(chǎn)品內(nèi)包材，如環(huán)烯烴聚合物（cyclic olefin polymer）類包材等，可能具有一定的透氣性，建議關(guān)注儲存期間二氧化 碳等氣體的滲透風(fēng)險(xiǎn)，充分評估包裝材料的適用性和風(fēng)險(xiǎn)控 制策略。
部分包裝病毒：是指存在基因組部分缺失或衣殼組裝不完整的病毒顆粒。
DNA 錯(cuò)誤包裝：指非目的基因組 DNA（如宿主細(xì)胞 DNA、質(zhì)粒 DNA 等）包裝入病毒顆粒的情況。
比滴度：通常以總顆粒數(shù)或病毒基因組滴度與感染滴度的比值表示，使用時(shí)應(yīng)予以明確。
[1] 國家藥典委員會.《中華人民共和國藥典》（ 2020 年版）.2020.
[2] NMPA.《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010 年修訂）》臨床試驗(yàn)用藥品附錄. 2022.[3] CDE. 體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）[EB/OL].2022.[4] NMPA. 生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）[EB/OL].2022.
冀公網(wǎng)安備 13010802000997號
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