所有生物除朊病毒外都含有核酸,核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。新型冠狀病毒(2019-nCoV)屬于Beta冠狀病毒屬(Betacoronavirus),該病毒是蛋白包裹的單鏈正鏈RNA病毒,寄生和感染高等動(dòng)物(包括人)。病毒中特異性RNA序列是區(qū)分該病毒與其它病原體的標(biāo)志物,新型冠狀病毒出現(xiàn)后,我國(guó)科學(xué)家已經(jīng)成功發(fā)現(xiàn)了新型冠狀病毒中的特異性核酸序列。如疑似患者樣本中能檢測(cè)到新型冠狀病毒的特異性核酸序列,則認(rèn)為該患者可能被新型冠狀病毒感染。
體外診斷試劑瓶
新型冠狀病毒常用的核酸診斷方法有兩種:病毒核酸特異基因檢測(cè)和病毒基因組測(cè)序。最常見(jiàn)的檢測(cè)新型冠狀病毒特異性核酸序列的方法是熒光定量PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))。由于新型冠狀病毒是RNA病毒,試劑盒檢測(cè)基本都采用反轉(zhuǎn)錄加實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR),擴(kuò)增病原體的核酸 (RNA) ,同時(shí)通過(guò)熒光探針實(shí)時(shí)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。在PCR反應(yīng)體系中,包含一對(duì)特異性引物以及一個(gè)Taqman探針,該探針為一段特異性寡核苷酸序列,兩端分別標(biāo)記了報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)。
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;如反應(yīng)體系存在靶序列,PCR反應(yīng)時(shí)探針與模板結(jié)合,DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解,報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,發(fā)出熒光。每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子產(chǎn)生。熒光定量PCR儀能夠監(jiān)測(cè)出熒光到達(dá)預(yù)先設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)(Ct值)與病毒核酸濃度有關(guān),病毒核酸濃度越高,Ct值越小。不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品會(huì)依據(jù)自身產(chǎn)品的性能確定本產(chǎn)品的陽(yáng)性判斷值。